抗酸染色法是結核桿菌細菌學檢查的常用方法。經典的妻—尼氏抗酸染色法操作過程較復雜, 存在以下缺點[1,2]:酒精燈加熱時間長, 難以掌握染料用量, 染料容易溢出玻片, 沾污實驗臺或地面;加熱時染液容易干涸, 須不斷補加染料;染色在開放環境進行, 容易造成結核桿菌播散哭染環境。為探索簡便、安全、易行的染色方法, 本文研制了可以調節染色溫度和時間的恒溫水浴箱觀察恒溫水浴加熱法對結核桿菌抗酸染色效果的影響, 現將結果報道如下。
1 臨床資料
1.1 一般資料
卡介苗為成都生物制品研究所產品, 萋-納氏抗酸染色液為珠海貝索生物技術公司產品。
1.2 模擬痰標本涂片制備
將卡介苗用1mL生理鹽水稀釋, 充分混勻后取適量卡介苗稀釋液加入到等量正常人痰液中, 混勻后涂片, 制作模擬痰標本玻片, 標本干燥后經火焰固定, 等待染色。
1.3 恒溫水浴加熱法抗酸染色
將固定后的模擬痰標本玻片放入自制恒溫水浴箱的托盤內滴加石炭酸復紅染液, 蓋上托盤蓋;開啟恒溫水浴箱電源開關, 調節溫度旋鈕 (設定50、60、70、80℃) 和定時旋鈕 (設定5min或10min) ;溫度達到設定溫度后, 儀器開始自動計時, 到達設定時間后儀器報警器鈴響, 關閉電源開關, 取出玻片, 加酸性酒精脫色1min, 流水沖洗后美藍復染30s, 干燥后用顯微鏡油鏡觀察細菌染色性和形態。
2 結果
采用恒溫水浴箱加熱法對結核桿菌進行抗酸染色, 染色時間為10min, 染色溫度分別為50、60、70℃和80℃, 染色結果見圖1。圖1結果顯示, 70℃恒溫水浴染色 (圖1-C) 效果良好, 菌體形態清晰, 色澤明亮;60℃恒溫水浴染色 (圖1-B) 效果一般, 菌體形態可辨, 色澤偏暗;50℃和80℃恒溫水浴染色 (圖1-A和D) 效果差, 可辨別的菌體較少, 色澤淡染。
3 討論
近年來, 全球結核疫情明顯回升, 結核病已成為了全球關注的公共衛生與社會問題[3], 結核桿菌的細菌學檢查愈加重要。結核桿菌對酸堿有較強的抵抗力, 一般染料難以進入菌體, 故結核桿菌著色困難。在染色過程中進行一定程度的加熱處理, 可以協助染料進入菌體。傳統加熱方法采用酒精燈火焰加熱, 火焰溫度過高, 溫度難以控制且加溫過程不穩定, 染液易在玻片上干涸。
本文使用恒溫水浴箱加熱法對結核桿菌進行抗酸染色效果觀察, 結果表明:恒溫水浴加熱溫度70℃、染色10min時, 結核桿菌染色陽性率高, 染色鮮艷, 對比度好, 背景清晰。恒溫水浴加熱溫度50℃、染色10min時, 菌體染色效果不明顯, 可能是由于結核桿菌菌體含有大量脂質, 在較低溫度條件下染料無法進入菌體細胞內。恒溫水浴加熱溫度為80℃、染色10min時, 染色效果不明顯, 可能是由于溫度過高造成菌體結構被破壞。本文建立的恒溫水浴箱加熱法, 一方面克服了傳統妻—尼氏抗酸染色法的弊端, 另一方面還能同時對多份標本涂片進行染色, 明顯提高工作效率?？傊? 恒溫水浴箱加熱抗酸染色法具有染色穩定性好、安全、環保、清潔等優點, 值得推廣應用。
摘要：目的 探討恒溫水浴加熱抗酸染色法能否改進結核分枝桿菌染色效果。方法 采用自制恒溫水浴箱對含有卡介苗的模擬痰標本涂片進行加熱染色, 調節加熱溫度和時間, 通過顯微鏡觀察比較染色效果差別。結果 70℃恒溫水浴染色10min, 結核桿菌菌體形態清晰, 色澤明亮, 染色效果良好。結論 改良后的恒溫水浴加熱抗酸染色法, 能夠精確控制染色溫度和時間, 染色效果良好, 同時還能減少環境污染, 值得推廣。
關鍵詞：恒溫水浴,抗酸染色,結核桿菌
參考文獻
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