在臨床上, 將射頻技術應用于治療軟骨的退變和損傷?；A研究上建立山羊軟骨退變的模型, 觀察射頻對退變軟骨的影響?，F將研究結果報道如下。
1 臨床資料
1.1 一般資料
選取10只健康山羊, 10~12個月齡, 重14~18kg, 雌雄不限。雙側膝關節同時進行造模手術。術前30min肌肉注射0.03mg/kg的阿托品。退去山羊雙側后膝關節手術區域毛發, 常規消毒, 定位手術切入點。關節腔穿刺, 切口長約6cm。灌洗后置關節鏡檢查、攝影。觀察關節鏡獲取畫面, 在直視狀態下, 沿髕骨內側支持帶呈“Z”字形縱向切開, 外側支持帶縱向切開。關節腔灌洗, 拔除關節鏡, 采用1號線重疊縫合外側支持帶, 延長松解縫合內側支持帶, 關閉傷口。術中凈滴抗生素, 術后肌注抗生素, 持續5d, 以防發生感染。手術前后分別對山羊兩側膝關節進行CT掃描, 以待留作實驗觀察。
1.2 雙極射頻處理
造模手術3個月后, 采用雙極射頻進行治療。選用山羊左膝為實驗側, 右膝為對照側。在左膝髕骨前正中切開長6cm的切口, 沿髕骨外側支持帶Z形切開, 將髕骨向外翻轉, 暴露髕骨關節面, 使用雙極射頻對退變軟骨進行消融治療。設定射頻能及為I級, 處理表面纖維化或由小裂紋的軟骨面時, 與軟骨面相距1 mm, 處理時間在1~2 s左右;處理非全層軟骨剝脫面時, 將邊緣處的不穩定軟骨全部消融, 時間控制在3~4s, 射頻頭均勻移動, 避免在一個地方停留較長時間。同時采用生理鹽水持續灌洗關節腔, 避免射頻所產生的熱量傷害軟骨。處理完畢后進行縫合。
右膝采用相同方法, 暴露髕骨關節面, 不使用雙極射頻進行治療, 僅進行觀察。
1.3 觀察指標
1.3.1 即刻反應觀察
從中選取5只山羊, 在射頻處理后, 觀察左膝經射頻處理部位的即刻反應, 觀察右膝軟骨退變情況。對實驗側和對照側分別進行光鏡、掃描電鏡觀察。10%中性甲醛固定軟骨組織, 脫鈣3d, 石蠟包裹切片, 染色劑染色后, 用光鏡觀察軟骨大體退變情況;電鏡液固定標本, 漂洗、乙醇脫水, 采用掃描電鏡進行觀察。
1.3.2 后期觀察
射頻處理后3個月, 將余下5只山羊處死, 并進行組織學觀察和流式細胞學檢測。組織學觀察方法與上述方法類似。流式細胞學檢測部位為實驗側和對照側軟骨。取軟骨樣品0.5cm×0.5cm, 剪碎成0.1cm×0.1cm碎片。將碎片機械勻漿, 3次, 分別抽取勻漿液。離心、棄上清, 瀝干加入PBS液體1.5m L, 細胞固定后放入冰箱過夜。過夜后, 離心、棄上清, 余液混勻, 加入PBS液體2m L, 再離心、棄上清, 余液混勻, 約留200u L。將PI終濃度調整為50mg/m L, 過濾后送入流式細胞儀, 自動計算正常細胞與死亡細胞的占比, 計數數目為8000~10000個。
2 結果
2.1 山羊造模結果
造模手術3個月后觀察山羊髕骨軟骨面, 出現不同程度的退變:軟骨失去光澤、彈性, 軟化, 表面不夠光滑, 是Ⅰ級退變的表現;若軟骨表面出現細小裂紋, 下極被滑膜組織覆蓋, 則是Ⅱ級退變的表現。
光鏡觀察結果顯示, 山羊髕骨內側面軟骨表層出現纖維樣病變, 少量軟骨細胞壞死掃描電鏡結果顯示, 山羊髕骨內側面粗糙, 有小裂紋出現, 膠原排列紊亂或出現斷裂。
2.2 即刻反應觀察結果
光鏡觀察結果顯示, 實驗組表面比較平坦, 纖維化組織和程度減少, 表層裂紋融合。實驗組治療區周邊軟骨組織與對照組相比, 無明顯差異。
掃描電鏡觀察結果顯示, Ⅰ級退變軟骨治療后光滑平整;Ⅱ級退變軟骨治療后, 表面裂紋融合, 軟骨面較光滑。
2.3 后期觀察結果
光鏡觀察結果顯示, 實驗側軟骨表面比較光滑, 有些部位出現裂紋, 但裂紋深度較淺。對照側軟骨面裂紋明顯比試驗側的深, 較多軟骨細胞壞死, 并可見細胞克隆樣增生。
掃描電鏡觀察結果顯示, 實驗側仍然光滑平整, 表面裂紋較少, 粗糙部位較少, 對照側粗糙程度加深, 軟骨表面出現各種裂紋。
流式細胞學檢測結果顯示, 實驗側軟骨細胞死亡率為 (16.98±6.39) %, 對照側軟骨細胞死亡率為 (26.17±14.01) %, 對照組明顯高于實驗組。
3 結語
在不同物種之間, 負重關節活動度和力學結構不同。研究發現山羊關節的活動度與人膝關節較為接近, 因此山羊模型被認為是建立關節軟骨缺損較好的模型[1]。
通過光鏡與掃描電鏡觀察, 不難發現, 在即刻反應結果與后期觀察中, 實驗側軟骨面情況均要好于對照側軟骨面情況。說明使用雙極射頻治療的軟骨, 開始逐步恢復, 雙極射頻用于治療軟腐損傷有一定療效。
此外有研究顯示軟骨細胞在50℃左右會發生死亡。因此在手術過程中, 注意使用冷生理鹽水沖洗, 可降低軟骨面溫度, 確保將雙極射頻對軟骨的損傷降低到很小[2], 由此可見, 雙極射頻是一種較為安全的療法。
摘要：目的 研究射頻治療軟骨損傷的可行性。方法 對山羊進行軟骨損傷造模, 對軟骨損傷面進行射頻治療, 觀察療效。結果 經過射頻處理的軟骨損傷面比未經處理的軟骨損傷面光滑平整, 對照組細胞死亡率明顯高于實驗組。結論 射頻技術是一種治療軟骨損傷安全而有效的方法。
關鍵詞：軟骨損傷,雙極射頻
參考文獻
[1] 左鎮華, 楊柳, 段小軍, 等.關節鏡制備膝關節軟骨缺損的動物模型[J].現代生物醫學進展, 2007, 7 (11) :1665～1666.
[2] 張君, 王友, 猴筱魁, 等.雙極射頻治療山羊髕骨軟骨退變的實驗研究[J].中華關節外科雜志, 2009, 3 (3) :33～37.