新生兒溶血病又稱母子血型不合溶血病, 是母親對胎兒紅細胞發生同種免疫反應引起的溶血性疾病, RH血型和ABO血型不符都能引起這種疾病, 但前者引起的比較嚴重, 是新生兒病理性黃疸最常見的原因, 也是引起新生兒高膽紅素的最重疾病, 目前已發現26個血型系統, 160種血型抗原, 在我國以ABO血型不合溶血病發生率最高, RH血型不合溶血病發生較少, 但Rh溶血臨床表現比ABO血型不合溶血病重。MN溶血最為罕見。為了解微柱凝膠試驗在新生兒溶血性疾病中的應用, 本研究采用MGT對189例疑為HDN的高膽紅素患兒進行了檢測, 收到良好效果, 現報道如下。
1 對象與方法
1.1 研究對象
189例疑為新生兒溶血病高膽紅素患兒均來自我院新生兒科自2009年9月至今的住院病人, 出生10d內的患兒為A型或B型, 母親為O型。
1.2 儀器與試劑
(1) 儀器:TD-3A型血型血清學多用離心機與FYQ免疫微柱孵育器 (均由長春博研科學儀器有限公司生產) 。MATICⅡKA-200血庫專用離心機 (日本KUBOTA公司) 。 (2) 試劑:新生兒溶血病血型不完全抗體檢測卡 (微柱凝膠檢測卡) 和6%小牛血清 (均由長春博迅生物技術有限責任公司提供) 。標準ABO紅細胞 (上海血液生物醫藥有限責任公司提供) 。試劑均在有效期內使用。
1.3 方法
取患兒的壓積紅細胞洗滌3遍, 制成0.5%～1%的紅細胞懸液備用。 (1) 直抗試驗:取Coombs卡1張, 于一孔內加入患者1%紅細胞懸液50μL, 將卡放入專用離心機上離心5min后判讀結果。 (2) 游離試驗:取Coombs卡1張, 分別標記A、B、O, 各加入1%A、B、O型標準紅細胞懸液50μL, 再各加入乙二胺四乙酸二鉀抗凝的患兒血漿50μL將此卡放入37℃專用孵育器孵育15min, 離心5min后判讀結果。 (3) 熱放散試驗:取Coombs卡1張, 分別標記A、B、O, 各加1%A、B、O型標準紅細胞懸液50μL, 再各加入紅細胞放散液50μL, 將此卡放入37℃專用孵育器孵育15min, 離心5min后判讀結果。
1.4 結果判定標準
3項試驗以出現凝集為陽性 (位于凝膠表面或凝膠中) , 紅細胞沉降到底部即為陰性。 (1) 游離和放散試驗均以檢出可以和新生兒紅細胞反應的抗體為陽性。 (2) 單項放散試驗陽性及其他項目陽性同時合并放散試驗陽性的結果均可判定為HDN陽性。 (3) 直抗及游離試驗2項同時陽性可判定為HDN陽性。 (4) 直抗或游離試驗1項陽性可疑為HDN。
1.5 統計學處理
所得數據采用卡方檢驗方法, 利用SPSS 14.0軟件進行統計結果P<0.05為差異有統計學意義。
2 結果
189例高膽紅素患兒與其母均為ABO血型不合, 即母親血型均為O型, RH (D) 陽性。母親血清中ABO血型以外抗體篩查均為陰性。其中母-嬰血型為OA者為96例, OB者為93例。采用MGT進行溶血3項檢測證實為HDN者為152例, 陽性率為80.42%。母-嬰OA型和OB型2組溶血3項試驗比較, 差異無統計學意義, P均>0.05, 見表1。
3 討論
隨著中國新生兒免疫學的進步, 已經完全改變了過去認為新生兒溶血病罕見的看法。過去未認識本病病因時, 曾稱其為“胎兒全身性水腫”、“胎兒有核紅細胞增多癥”、“先天性新生兒重癥黃疸”、“新生兒溶血癥”等?，F在明確了解其發病機理而不是癥狀故已統一命名為“新生兒溶血病”。新生兒溶血病 (HDN) 是指母嬰血型不合引起的新生兒免疫性溶血性疾病。在我國最常見于ABO血型系統不合, 其次RH血型系統不合。HDN的發病主要原因是新生兒溶血病是因胎兒紅細胞具有從父親遺傳而來, 而又為母親紅細胞所缺乏的抗原, 此種紅細胞血型抗原在胎兒時期進入母體, 刺激母體產生相應的血型抗體, 此種血型抗體中的IgG抗體透過胎盤進入胎兒體內與胎兒紅細胞抗原產生抗原抗體反應, 破壞胎兒紅細胞而引起新生兒溶血病。病情的嚴重程度不同, 重者可在宮內死亡, 臨床上可根據“溶血3項試驗”, 即紅細胞抗球蛋白試驗、抗體放散試驗和血清游離抗體試驗做出診斷[1]。RH新生兒溶血病因孕婦和胎兒的RH血型不符而引起的疾病。若孕婦為RH (-) , 胎兒為RH (+) (有D抗原) , 當孕婦第一胎分娩胎盤剝離時, 胎兒的紅細胞進入母體會刺激母體產生抗D抗體 (IgG) ?？笵抗體在母體懷第二胎時可通過胎盤進入胎兒, 與胎兒的紅細胞結合, 引起胎兒發生溶血病。ABO新生兒溶血病因孕婦與胎兒ABO血型不符而引起的疾病。多見于O型孕婦, 尤其多見于O型孕婦和A型胎兒。由于天然的抗A或抗B抗體 (IgM) 的分子大, 不能通過胎盤進入胎兒血循環, 而母親為O型者比A型或B型人更容易產生抗A或抗B的IgG抗體, IgG抗體則能通過胎盤進入胎兒血循環, 引起胎兒發生溶血病。A或B抗原也與部分抗A或抗B抗體發生作用, 而且抗A的量高于抗B。但這類病例不多, 病情也比較輕, 加以胎兒血管內皮和組織細胞上有血型抗原, 可部分吸收對應抗體, 以減少抗體對紅細胞的破壞。ABO血型的“天然”抗體主要是IgM類, 但也有IgG類, 后者有引起新生兒溶血病的可能[2,3,4,5]。微柱凝膠試驗技術 (MGT) 是一種新的改良抗球蛋白試驗技術, 在國外輸血領域已逐步作為常規應用。采用MGT做HDN檢測, 對提高ABOHDN的診斷率有實際意義。本研究采用MGT法檢測189例ABO血型不合的新生兒標本。母-嬰血型OA者96例, 檢出HDN陽性率為82.29%;O-B者為93例, HDN陽性率為78.49%。2組比較, 差異無統計學意義P均>0.05。說明ABO HDN的發生率與嬰兒A、B血型無關, 在ABO血型中呈正態分布。另處, 母親血清中ABO血型以外抗體篩查均為陰性, 未發現RHHDN, 可能與檢測的病例較少有關。MGT作為一項十分必要的檢測手段, 具有敏感度高, 特異度顯著, 操作簡便, 耗時40分鐘左右, 標本用量少, 結果易判定等優點, 對臨床早期診斷早期治療母嬰ABO血型不合引起的新生兒溶血病提供了重要的參考依據, 應廣泛應用于臨床。
摘要：目的 探討微柱凝膠試驗 (MGT) 技術在新生兒溶血病 (HDN) 中的應用。方法 采用微柱凝膠試驗技術對189例疑為HDN的高膽紅素患兒做“溶血三項試驗”, 即: (1) 紅細胞抗球蛋白試驗; (2) 抗體放散試驗; (3) 血清游離抗體試驗。結果 A型與B型2組患兒 (母親O型) HDN檢驗結果比較, 2組HDN陽性率比較差異無統計學意義。結論 MGT具有敏感度高, 特異度顯著, 操作簡便, 耗時40min左右, 標本用量少, 結果易判定等優點, 值得臨床推廣應用。
關鍵詞：微柱凝膠試驗技術,新生兒溶血病
參考文獻
[1] 宋繼軍, 趙鼎, 岳曉紅.微柱凝膠檢測新生兒溶血病的使用[J].臨床醫學, 2009, 29 (5) :86～87.
[2] 張旭, 彭獻, 劉雄偉, 等.微柱凝膠檢測技術在新生兒溶血篩查試驗中的應用[J].檢驗醫學與臨床, 2008, 6 (10) :583～584.
[3] 黎世杰, 羅廣平, 趙陽.微柱凝膠技術試驗在新生兒溶血病檢測中的應用[J].熱帶醫學雜志, 2006, 6 (5) :549～551.
[4] 羅梅, 何靜, 陳方祥, 等.新生兒黃疸血清學檢測結果分析[J].現代醫藥衛生, 2006, 22 (6) :804～805.
[5] 張麗, 馮強.新生兒溶血病的檢測與防治進展[J].實用醫技雜志, 2005, 12 (1) :254～255.