病毒核酸檢測技術范文第1篇
一、基本原則
按照“統一領導、立足全鄉、全面動員、分級負責、反應迅速、處置果斷、精準檢測、加強配合”的原則開展核酸檢測工作。
二、檢測范圍
根據疫情發生情況，科學、精準劃定檢測范圍。
（一）村居（社區）全員檢測。
經專家組研判，疫情傳播風險僅局限于某個村居或社區，在某個村居或社區開展全員檢測。
（二）全鄉全員檢測。
經專家組研判，疫情傳播風險局限在鄉域范圍，且不會造成周邊鄉鎮傳播風險，在全鄉范圍開展全員檢測。
三、檢測程序
根據疫情防控需要和感染風險評估結果，確定風險人群范圍，根據感染風險大小確定檢測優先次序，實現檢測區域內的戶籍人口、暫住人口和流動人口核酸檢測應檢盡檢，不漏一人。
（一）重點人群。
疫情發生后對病例和無癥狀感染者的密切接觸者、密接的密接以及有共同暴露史人群第一時間開展檢測;其次對報告疫情村居人員、疫情發生地周邊村居人員以及區域內快遞員、出租車司機、公交車司機等人員開展檢測，實行單人單管，標本采樣送檢應在接到報告后的6小時內完成，檢測機構必須在收到標本后6小時內反饋檢測結果。
（二）局部區域居民。
疫情發生后，需局部區域居民檢測的，除重點人群外，其他居民按1:10混樣采集樣本，2天內完成標本采集及核酸檢測工作。難以按期完成的，報鄉指揮部，由鄉統一調配力量。
（三）全員居民。
疫情發生后，需全員居民檢測的，除重點人群外，其他居民按1:10混樣采集樣本。全鄉范圍內全員檢測在3天內完成標本采集及核酸檢測;難以按期完成的，由鄉委領導小組上報縣委領導小組申請對口支援。
（四）檢測順序。
按照重點人群→醫務人員、采樣人員、檢測服務人員→其他居民的順序開展采樣及核酸檢測工作。
全員檢測根據專家組研判結果，按疫情發生點為核心，漸次擴大檢測區域：核心村居→核心社區→全鄉。
四、隊伍組成
（一）社防隊。
以村為單位組建，要明確各防控隊區域分工及聯絡員、聯系方式。結合人口普查，負責對轄區內居住人口開展摸排、登記并形成一覽表(包括村居、姓名、性別、年齡、身份證、聯系電話(本人或者家人)、是否是常住人口，在全員核酸檢測時負責召集和組織有序檢測等工作。
（二）采樣隊。
以現有采樣隊為基礎，結合轄區居民數量，按照每人每天采樣500份標準，進一步擴充采樣人員數量，全鄉至少配備60名采樣隊員的預備隊。衛生院至少配備4人的采樣預備隊。當開展全員檢測時，社區采樣預備隊作為第一梯隊，其他社區采樣預備隊作為第二梯隊進行支援。按每個采樣小組由2名采樣人員，4-5名登記管理人員組成。組長由管理區書記或主任擔任，小組所有工作以服務和滿足順暢采樣為核心。加強采樣人員技術培訓和采樣小組個人防護演練。每一名采樣人員必須經過生物安全培訓及采樣技術培訓，合格后方可進行樣本采集工作。
（三）信息隊。
每個采樣小組登記管理人員4-5人中有1名衛生專業人員，其他人員以機關干部、基層工作人員和志愿者組成。每個采樣小組配備電腦至少1臺、采樣(轉運)箱和采樣用品若干(滿足每天最大采樣量)。由衛生專業人員每天按照規定時間匯總采樣情況進行上報。采樣登記管理人員需熟悉微機操作，負責樣本采集登記、信息錄入等工作。機關干部按各部門、單位全體在職干部1/4-1/3的員額準備;基層干部按1/2-2/3的員額準備。
（四）檢測隊。
衛生院確定1名核酸檢測人員作為縣級檢測第二梯隊。后備檢測人員培訓要在11月中旬前完成。
（五）流調隊。
在現有流調隊伍基礎上，進一步優化隊伍組成，將公安、通信、社區等相關部門、單位工作人員一并納入，緊密配合，確保第一時間開展密接、次密接、一般接觸者、可疑暴露者以及其他有風險人員的排查工作。組織專家組，統一調度流調信息，特別要充分利用好大數據，研判疫情形勢，提出檢測的技術意見，增加流調、檢測工作的精準性、科學性、可靠性。
（六）送樣隊。
要科學調配標本運送車，每車確定2-3名運送人員。要加強標本轉運人員個人防護和轉運知識培訓，確保在符合生物安全要求的情況下，進行標本的收集和轉運工作，第一時間送至指定的檢測機構。
（七）消殺隊。
由鄉指揮部組建專業消殺隊，主要負責疫點、疫區、病例和標本轉運車輛的消殺和指導。各村居(社區)組建不少于30人的環境消殺隊，主要負責村居環境消殺管理。
（八）維穩隊。
每個采樣點至少配備2名公安干警、5-10名維穩人員，負責采樣點秩序維持(配備隔離線)、安全穩定、個人防護監督等工作，確保采樣安全有序進行。對不服從安排、擾亂采樣秩序等人員依法依規予以處理。
（九）后勤隊。
由鄉黨政辦公室組建后勤保障隊，負責采樣檢測人員的生活保障。
（十）校驗隊。
負責對登記的信息進行校驗，錄入健康碼系統。在專業人員指導下，由熟悉微機操作的機關干部，按每人每天錄入2000條信息的標準準備，在檢測結果出來后24小時內錄入系統。
（十一）協調隊。
由鄉領導小組(指揮部)及有關工作專班組成，分力量調度、信息核查等若干小組，綜合協調調度，匯總相關信息。由鄉疫情防控指揮部辦公室協調匯總相關信息。
五、采樣點設置
（一）集中采樣點。
在人口密集地的社區、村莊、學校、企業等設置集中采樣點，原則上每個采樣點覆蓋人口2000人左右。每個集中采樣點設若干采樣小組。采樣小組的數量按一天內全部完成采樣設置。采樣場地優先選擇體育場、廣場、學校操場、公園等相對空曠、通風良好、有電力供應的地區，被采集人員單向有序流動，無交叉，具備一定的現場消殺及采樣人員個人防護要求，標本存放運輸符合生物安全要求。
（二）流動采樣點。
對偏遠地區或人員較少的地方，設置流動采樣點。設置原則參照集中采樣點。
六、被采樣人員注意事項
為保證核酸檢測工作有序推進，避免交叉感染，要求被采樣人員需做到：
（一）帶好身份證等個人有效證件和手機；
（二）做好個人防護，在等待檢測過程中佩戴口罩，檢測完后立即戴上口罩；
（三）有序排隊檢測，盡量相距1米以上；
（四）采樣前2小時盡量避免進食，采樣前30分鐘不吸煙、喝酒、咀嚼口香糖；
（五）聽從指揮，主動配合，采集完成后盡快離開采集點；
（六）核酸檢測前后注意手部衛生，使用免洗手消毒液或免洗酒精擦拭雙手。
六、組織實施
（一）鄉領導小組（指揮部）負責組織實施全鄉全員檢測工作、指揮調度檢測、采樣隊伍支援保障，對全鄉檢測相關流程進行規范指導。
（二）鄉鎮領導小組（指揮部）負責轄區內采樣檢測任務。
根據檢測人群數量，統一部署采樣點設置、人員組織、信息登記、采集流程、轉運送檢、核酸檢測等工作，統籌安排采樣隊伍和檢測隊伍，確保規定時間內完成檢測任務。
七、工作保障
按照誰執行任務誰負責保障的原則落實屬地、單位責任。
（一）資金保障。
全員檢測所需資金由鄉財政承擔，不得對被采樣人員收取任何費用。
（二）物資保障。
統籌做好物資(車輛、耗材、試劑、防護用品、轉運箱、電腦、遮陽棚、桌椅等)采購及儲備工作，常態儲備量要不低于總需求量的30%。物資2小時到位率達到100%。必要時可以征用、借用。
（三）信息保障。
各檢測機構、采樣點、采樣隊伍之間要建立聯系，指派專人負責，明確聯絡員，保證信息暢通，確保第一時間反饋檢測信息。
（四）安全保障。
所有工作人員要加強個人安全防護。采集和運送低風險區域人群的工作人員，可采用二級生物安全防護;標本接收和檢測人員，采用三級生物安全防護。所有被采樣人員要佩戴口罩，現場測量體溫。
病毒核酸檢測技術范文第2篇
核酸的定義：核酸是由核苷酸或脫氧核苷酸通過3′，5′-磷酸二酯鍵連接而成的一類生物大分子。
核酸具有非常重要的生物功能，主要是貯存遺傳信息和傳遞遺傳信息。
2.核酸的分類
核酸大分子可分為兩類：脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。
3.核酸的組成
DNA和RNA都是由一個一個核苷酸(nucleotide)頭尾相連而形成的，由C、H、O、N、P，5種元素組成。DNA是絕大多數生物的遺傳物質，RNA是少數不含DNA的病毒(如HIV病毒，流感病毒，SARS病毒等)的遺傳物質。RNA平均長度大約為2000個核苷酸，而人的DNA卻是很長的，約有3X10^9個核苷酸。
4.核酸的功能
在蛋白質的復制和合成中起著儲存和傳遞遺傳信息的作用。核酸不僅是基本的遺傳物質，而且在蛋白質的生物合成上也占重要位置，因而在生長、遺傳、變異等一系列重大生命現象中起決定性的作用。
DNA與RNA都是核酸，它們在化學組成上有什么區別如下：
DNA與RNA的比較
DNA
RNA
主要存在部位
細胞核
細胞質
基本組成單位
脫氧核苷酸
核糖核苷酸
堿基種類
A、G、C、T
A、G、C、U
五碳糖種類
脫氧核糖
核糖
核苷酸鏈
兩條脫氧核苷酸鏈
一條核糖核苷酸鏈
5.檢測方法
核酸檢測方法，主要通過同時進行靶核酸擴增和可檢測信號的生成來檢測樣品中的靶核酸?？蓱糜谂R床微生
物學、血液篩選、遺傳病診斷和預防、法醫學等領域的核酸檢測。
目前主要使用的方法有以下幾種：
a.核酸序列依賴性擴增法
NASBA是由一對引物介導的、連續均一的、體外特異性核苷酸序列等溫擴增RNA的新技術。反應在42℃進行,可在2h內將RNA模板擴增約109倍。NASBA原理是提取病毒RNA,加入AMV逆轉錄酶、RNA酶H、T7RNA聚合酶和引物進行擴增。整個反應分非循環相和循環相:在非循環相中,引物I與模板RNA退火后在AMV逆轉錄酶的作用下合成cDNA,形成RNA:DNA雜合體,隨即RNaseH降解RNA,引物Ⅱ與cDNA退火,在反轉錄酶作用下合成第2條DNA互補鏈。雙鏈DNA可在T7RNA聚合酶的作用下,經其啟動子序列起動而轉錄RNA，RNA又可在反轉錄酶的作用下反轉錄成DNA，進入循環相,對模板進行大量擴增。
b.轉錄介導的擴增技術
TMA技術原理與NASBA基本一致，略有不同之處是TMA利用的是MMLV逆轉錄酶及T7RNA聚合酶兩種酶，MMLV逆轉錄酶既有逆轉錄酶的活性又具有RNA酶H活性。反應在41.5℃進行,可在1h內將RNA模板擴增約109倍。
c.連接酶酶促鏈式反應(LCR)
LCR是基于靶分子依賴的寡核苷酸探針相互連接的一種
探針擴增技術，是繼PCR后新發展的一種較有前景的體外擴增技術。它的原理就是由2段寡核苷酸單鏈DNA探針與目標序列雜交,當該2段DNA探針與沒有發生突變的模板褪火后,如果2探針是緊鄰的,中間沒有核苷酸間隔,則可在連接酶作用下連接起來,連接以后的新鏈又可以作為模板,引導下一周期的連接產生新的子鏈。若連接區段發生核苷酸的堿基突變,則連接反應不能發生,擴增反應終止。
d.多聚酶鏈反應檢測法(PCR)
PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性—退火—延伸三個基本反應步驟構成。
①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備。
②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合。
③引物的延伸：DNA模板—引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成1條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈，重復循環變性—退火—延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次
循環的模板。每完成1個循環需2～4min，2～3h就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。檢測HIVRNA,需要先利用逆轉錄反應將RNA轉錄為cDNA，繼而以cDNA為模板進行PCR擴增即可，這樣的反應稱為RT-PCR。
e.實時熒光定量PCR技術
實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
本技術的原理是使用熒光基團標記探針,5′端標記熒光基團R,3′端標記淬滅基團Q,在沒有PCR擴增時,由于熒光基團和淬滅基團空間距離很近,使熒光基團被淬滅,不發熒光;而當PCR擴增時,引物與熒光標記的特異性探針同時結合在模板上,熒光標記的探針與模板的結合位置位于上下游引物之間,利用Taq酶的5′3′外切酶活性,將熒光探針水解,熒光基團被釋放出來,由于在空間上與淬滅基團分開,則發出熒光。發出的熒光可以被熒光探頭檢測到,一邊擴增,一邊檢測,這樣就實現了“實時”檢測。該技術不僅實現了PCR從半定量到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性強、自動化程度高、有效解決了PCR污染問題等特點。
f.支鏈DNA檢測法——bDNA
bDNA是定量檢測血漿中的HIV1型RNA的一種方法。bDNA是指人工合成的帶有側鏈的DNA片段,在其每個側鏈上
都可以標記被激發的標記物。將HIV的RNA通過離心從病毒顆粒中釋放出來,然后用捕獲探針1將其捕獲到微孔中。捕獲探針2與病毒RNA的另一部分特異結合,又與預放大探針結合。后者再與放大探針即bDNA探針雜交。兩套靶探針分別與病毒RNA的pol基因的不同區域特異結合。在微孔中形成HIVRNA寡核苷酸復合物。再加入1種化學發光底物孵育后可放大化學發光信號。通過發光強度來定量,因為發光強度與樣品中HIVRNA含量成比例。bDNA不存在擴增物的交叉污染,這較PCR是一大進步。bDNA有數十個覆蓋整個基因組的探針,可以方便地檢測HIV某些變異株,但靈敏度不及PCR，提高bDNA靈敏度是一大難點。
檢測步驟
HIV核酸定性檢測技術，其檢測過程分為核酸提取、逆轉錄合成cDNA、PCR擴增反應、擴增產物定性分和結果判定和完成報告單。
6.實驗室檢測具體步驟如下：
a.核酸提取
使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備并按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置于-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置于-80℃保存。
b.逆轉錄合成cDNA
逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。
c.PCR擴增反應(使用二次擴增的套式PCR擴增方法)
PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶(如Taq酶等)、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板(DNA或cDNA)。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。使用二次擴增的套式PCR擴增方法。
e.擴增產物定性分析
擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標準比較，判斷擴增片段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。自動化核酸擴增儀使用酶聯比色分析或熒光探針雜交等原理測定。
f.結果判定和完成報告單
(1)實驗成立的條件：每一次檢測需同時做兩個陽性
對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。
(2)HIV核酸檢測陽性：發現核酸陽性反應，應該重復采集樣品進行復測，復測結果呈核酸陽性反應則判定為核酸陽性，復測結果為核酸陰性反應則判為不確定結果，需進一步隨訪檢測。
(3)HIV核酸檢測陰性：只可報告本次實驗結果陰性。
病毒核酸檢測技術范文第3篇
4、5班 授課日期 2014.2.27-28 授課教師
模塊三,臨床細菌學
學習任務二 第14章 分枝桿菌、放線菌與諾卡菌 【學習目標】
1.掌握結核分枝桿菌的基本特性及實驗室檢查方法 2.熟悉結核分枝桿菌的臨床意義 3.了解分枝菌屬的分類 【教學重難點】
重點：結核分枝桿菌的基本特性及實驗室檢查方法 難點：實驗室檢查方法 【教學方法】 講授+自主+討論 【導入新課】
復習前面的內容、提問及一些關于結核桿菌的故事，臨床上對結核病的檢測依據是是什么，通過什么樣的檢查才能盡快盡早對病情進行臨床診斷，這就是我們今天要學習的內容。 【教學內容】
第14章 分枝桿菌 放線菌與諾卡菌 概 述
分枝桿菌與放線菌屬放線菌目（Actinomycetates）
分枝桿菌屬（Mycobacterium）是一類細長略帶彎曲專性需氧性桿菌。該菌一般認為革蘭染色陽性。多數細菌在生長的一定時期抵抗酸-醇（acid-alcohol-fast），故又稱抗酸桿菌（acid-fast bacillus）
放線菌（Actinomyces）是一群在生物學特性上與細菌類同的原核細胞型微生物，與分枝桿菌、棒狀桿菌等有著親緣關系
放線菌是多數不致病，對人致病的主要有放線菌屬和諾卡菌屬。
前者為厭氧或微需氧菌，細胞壁中不含分枝菌酸，多引起內源性感染。
后者為需氧菌，細胞壁中含有分枝菌酸，非人體正常菌群的成員，常引起外源性感染。
第一節 結核分枝桿菌
結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）簡稱結核桿菌、人和動物結核病的病原菌
一、分 類 MTB包括
人結核分枝桿菌（M.tuberculosis）
牛分枝桿菌（M.bovis）
非洲分枝桿菌（M.africanum）
坎納分枝桿菌（M.canettii）
田鼠分枝桿菌(M.microti)等
前四種對人類致病，其中人型MTB感染率最高
二、臨床意義
大約1/3的人口已感染MTB 有2000萬活動性結核病患者
每年新發病900萬人，死于結核病300萬人
近年來，AIDS的發病率上升，AIDS患者又極易患結核病，結核病已成為威脅人類健康的一個嚴重的全球性公共衛生問題
1 WHO已把結核病與AIDS、瘧疾一起列為人類的最主要殺手
(一) 所致疾病
通過呼吸道、消化道和損傷的皮膚等多途徑 感染機體，引起多種臟器的結核病，其中以肺結核為多見 (二)免疫性
有菌免疫或稱傳染性免疫 細胞免疫
遲發型超敏反應 (三) 變異
• 結核分枝桿菌易發生形態、菌落、生長溫度、毒力以及耐藥性的變異
• 卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin，BCG）是有毒力的牛型結核分枝桿菌在甘油、膽汁和馬鈴薯的培養基中經13年230次傳代而獲得的減毒變異株 • 現已廣泛用于人類結核病的防治 •
二、臨床意義 (四)耐藥性
• 對常見抗菌藥物天然耐藥
• 多重耐藥結核病(multiple-drug resistance tuberculosis，MDRTB)是指對2種或2種以上的抗結核藥產生耐藥性的結核菌感染。臨床治療相當棘手，死亡率很高
三、微生物學檢驗
（一）基本特性
•
結核分枝桿菌尚未發現產生內毒素、外毒素及侵襲性酶
• 致病性可能與細菌在組織細胞內大量繁殖引起的炎癥、代謝物質的毒性以及菌體成分引起的免疫損傷有關
• 結核分枝桿菌的致病物質主要是莢膜、脂質和蛋白質
（二）標本采集
• 據感染部位的不同采集不同的標本
• 疑肺結核：收集清晨第一口痰，清潔干燥的容器內送檢
• 疑泌尿系結核：清晨一次全部尿量或24小時尿沉淀10～15ml送檢，必要時作無菌導尿送檢（診斷泌尿道結核通常需3～5份標本）
• 采集膿液應直接從潰瘍處取膿汁或分泌物,深部膿腫用無菌注射器抽取送檢
• 其他：無菌抽取腦脊液、胸水、腹水及關節液等盛無菌試管送檢。腦脊液標本靜置后，表面可有細薄凝塊，取凝塊作涂片或接種培養
（三）標本直接檢查
1. 形態學檢查
（1）直接涂片染色鏡檢
（2）濃縮集菌涂片檢查法
2. 核酸檢測 • 形態學檢查
• 齊-尼染色（Ziehl-Neelsen technique）是常用的抗酸染色法，染色后結核分枝桿菌呈紅色，背景呈藍色 • 形態學檢查
• 用熒光染料金胺“O”染色，在熒光顯微鏡下菌體呈橘黃色 • 用PCR法快速診斷MTB感染
• PCR法檢測DNA特異性更強，敏感性更高
• PCR須按法規要求規范操作，應防止標本污染出現假性結果
（四）分離培養與鑒定
1. 培養特性
– 專性需氧
2 – 3％～5％CO2能促進其生長
– 營養要求高:須在含血清、卵黃、馬鈴薯、甘油以及含某些無機鹽類的特殊培養基上才能生長良好。常用羅氏培養基
– 最適生長溫度為35～37℃，最適pH6.5～6.8 – 14～18h分裂1次，在固體培養基上2～5周才出現肉眼可見的菌落
– 典型菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，如菜花樣
2.分離培養
• 標本接種于選擇性培養基中(常用羅氏，所含的孔雀綠或青霉素可抑制雜菌生長) • 37℃，5％～10％CO2培養8周
• 結核桿菌出現干燥呈顆粒狀、灰白色菌落 • 涂片染色為抗酸陽性 •
三、微生物學檢驗 3. 菌種鑒定 (1) 生化反應
（2）噬菌體鑒定法
（3）分子生物法菌種鑒定
(4) 高效液相色譜（HPLC）檢測分枝菌酸
• 生化反應--煩瑣、費時（ 4～8 周）,影響因素多 • 結核分枝桿菌不發酵糖類 • 能產生觸酶
• 人型MTB能合成煙酸，還原硝酸鹽，耐受噻吩-2-羧酸酰肼，而牛型MTB則不能 • 人型和牛型的毒株中性紅試驗均陽性，無毒株則為陰性，并失去索狀生長現象 • 噬菌體鑒定法（PhaB）
• Wilson 等于1997年建立的快速檢測新技術
• 原理：是分枝桿菌噬菌體D29能感染活的分枝桿菌,未進入感染菌體內的噬菌體被隨后加入的殺毒劑滅活 ,已進入菌體內的噬菌體不受影響。噬菌體在感染菌體內大量增殖 ,并將菌體裂解 ,釋放出的子代噬菌體可感染隨后加入的指示細胞 ,并將其裂解 ,在瓊脂平板上出現透亮的噬菌斑。
• 分子生物法菌種鑒定
• PCR 限制性片段長度多態性分析（PCR-RFLP） • PCR單鏈構象多態性分析（PCR-SSCP） • 核酸探針 • 核酸序列分析 • 多重PCR • 高效液相色譜（HPLC）
• 檢測分枝菌酸：由于不同種的分枝桿菌細胞壁中的分枝菌酸不同，所以利用HPLC檢測分枝菌酸可鑒定菌種。 •
三、微生物學檢驗
（五） 免疫學診斷 1．結核菌素試驗
2．結核分枝桿菌抗原檢測 3. 結核分枝桿菌抗體檢測 4. 全血干擾素測定法
結核菌素試驗
• 針對舊結核菌素(OT)與結核菌素純蛋白衍生物(PPD)兩種菌體蛋白
• 原理：當將蛋白注入皮內后，如受試者已感染結核桿菌，則結核菌素與致敏淋巴細胞特異性結合，在局部釋放淋巴因子，形成遲發性超敏反應性炎癥，若受試者未感染MTB則無反應。
3 結核分枝桿菌抗原檢測
• 用ELISA 方法在血清中檢測結核分枝桿菌抗原-結核菌外分泌特異性抗原 (external secreted specific antigen) 濃度。
• 任何體液如血液、痰液、脊髓液、尿液和各式組織萃取液等體液可用于檢測特異蛋白抗原。 結核抗體
• 作為活動性MTB感染的快速診斷方法之一
• 比傳統的痰涂片抗酸染色、MTB培養等方法簡便、快速、敏感性高，但存在一定的假陽性。 • 近年，膠體金、蛋白芯片檢查結核桿菌IgG抗體抗體，特別是后者，針對三種抗原（脂阿拉伯甘露糖、38K Da和16K Da蛋白質抗原），其靈敏度和特異性均有所提高。 全血干擾素測定法
• 原理：當全血與PPD和對照抗原（植物血凝素）共同孵育后，致敏的淋巴細胞可分泌IFN-γ，通過檢測IFN-γ的含量來鑒定菌種。
• 2004年，Quantiferon-TB Gold assay 問世，應用結核分枝桿菌RD1區域編碼的早期分泌抗原靶（ESAT）和培養濾液蛋白（CFP-10）特異抗原刺激細胞檢測。
• 近來ESAT/CFP-10融合蛋白-ELISPOT用于診斷活動性結核病，準確、靈敏、特異、快速。 • 結果與結核菌素試驗相當，干擾因素小。
（六）藥物敏感性試驗
• 將純培養物菌懸液，接種含各種濃度藥物的固體培養基上，同時做不含藥物的對照組。 • 經過培養，含有藥物的培養基上菌落數目是對照組的75％以上，則認為該菌對該藥物濃度為完全耐藥，如無菌落生長則為敏感。
【小結】
結核分枝桿菌為專性需氧，營養要求較高。生長緩慢，在固體培養基上2～5周才出現肉眼可見的菌落。典型菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，如菜花樣。微生物檢驗包括染色鏡檢、核酸檢測、分離培養、鑒定試驗、免疫學診斷和藥物敏感性試驗。
【課后預習】非結核分支桿菌，放線菌、卡諾菌 【課后作業】
1、如何進行結核分支桿菌的微生物學檢驗？
病毒核酸檢測技術范文第4篇
一、單項選擇題(共50題，每題2分。每題的備選項中，只有一個最符合題意)
1.目前認為，不屬于“心身疾病”范疇的是( E )
A.冠心病
B.支氣管哮喘
C.潰瘍病
D.惡性腫瘤
E.病毒性肝炎
2.環磷酰胺的不良反應不包括
A.血壓升高
B.惡心、嘔吐
C.脫發
D.骨髓抑制
E.出血性膀胱炎
正確答案:A
3.生物地球化學性疾病的發生主要是由于( )
A.人體攝入微量元素過多所致
B.人體攝入微量元素過少所致 C.地質地理原因使當地居民攝入微量元素過多或過少所致
D.環境破壞對地質條件影響使人體攝入礦物質異常所致
E.飲食中某種元素含量異常所致
4.地高辛的血漿半衰期為
A.40小時
B.5~7天
C.18小時
D.48小時
E.23小時
正確答案:A
5. 測量衛生服務利用的常用指標有：( C )
A、兩周患病率
B、慢性病患病率
C、兩周患者就診率
D、兩周患病天數
6. 下列關于問題和答案設計說法不正確的是( B )
A 對于事先不知道問題答案的情況可設置開放式問題
B 對于等級問題，開放式問題比封閉式問題更能獲得相對真實的回答
C 封閉式問題更便于統計處理和分析 D 封閉式問題可將不相干的回答減少到最小程度
7. 氣短，心電圖顯示陣發性室性心動過速，宜選用的抗心律失常藥物是
A.普萘洛爾
B.利多卡因
C.維拉帕米
D.異丙吡胺
E.苯妥英鈉
正確答案:B
8. 對硝酸甘油藥理作用描述正確的是
A.僅對小動脈有擴張作用
B.對全身小靜脈和小動脈都有擴張作用
C.對冠狀動脈和側支血管無擴張作用
D.對阻力血管有明顯的擴張作用
E.可引起支氣管、膽道平滑肌收縮
正確答案:B
9. 化療指數是指
A.LD/ED
B.ED/LD
C.LD/ED D.ED/LD
E.LD/ED
正確答案:C
10. 觀察法的缺點或局限性在于它的( D )：
A 有效性 B 可靠性 C 說服力 D 時間彈性
11. 以下哪種現場調查是最為常用的方式 ( B )
A 面談法 B 信函調查法 C 電話調查法 D 集中調查法
12. 心肌梗死患者出現室性心動過速首選
A.普萘洛爾
B.維拉帕米
C.利多卡因
D.苯妥英鈉
E.丙吡胺
正確答案:C
13. 毒物作用于機體，使機體產生超出其維持平衡狀態能力的生物學變化的最小暴露水平或劑量稱為( a )
A.閾濃度
B.閾上濃度
C.閾下濃度
D.急性閾濃度
E.慢性閾濃度
14. 關于DNA聚合酶Ⅲ的性質，下列哪項是錯誤的
A.原核生物復制延長中起催化作用的酶
B.a，ε，0組成該酶的核心酶
C.含有Klenow大片段
D.ε亞基是復制保真性必需的
E.b亞基起夾穩模板鏈并使酶沿模板鏈滑動的作用
15. 高溫車間是指車間內氣溫比室外夏季設計通風計算溫度高2℃以上。關于隨機抽樣，下面哪一個正確
A.隨機抽樣即隨意抽取個體
B.抽樣時精心挑選個體，能使樣本更好代表總體
C.抽樣時應使總體中的所有個體有同等機會被抽取
D.抽樣時樣本量越大越好
E.嚴格執行隨機抽樣，可以避免抽樣誤差
[正確答案]：C
解題思路：隨機抽樣的核心是要使總體中的所有個體都有同等機會被抽取，而A、B、C、D、E選項均為干擾項。
16. 生命質量評價目前主要應用的領域不包括 ( D )
A、人群健康狀況的測定與評價
B、慢性病患者健康評價與治療決策
C、藥效評價和衛生管理決策
D、基礎病理研究
17. 抑制DNA回旋酶，使DNA復制受阻，導致DNA降解而細菌死亡的藥物是
A.甲氧芐啶
B.諾氟沙星
C.利福平
D.紅霉素
E.對氨基水楊酸
正確答案:B
18. 關于ⅠA類抗心律失常藥物的描述不正確的是
A.抑制Na內流和促進K外流
B.減慢0相除極化速度
C.延長APD和ERP
D.降低膜反應性
E.適度阻滯鈉通道
正確答案:A
19. 關于健康危險因素，下列敘述正確的是( C )
A 健康危險因素主要是指自然環境中對人群健康不利的因素
B 健康教育主要針對慢性病自然史的第三個階段即致病因素出現時進行干預的
C 人們一般就醫的習慣是在慢性病自然史的第四個階段即癥狀出現
D 健康危險因素的評價一般只用于對個體進行評價
20. 克拉維酸為下列哪種酶的抑制劑
A.二氫葉酸還原酶
B.DNA回旋酶
C.二氫葉酸合成酶
D.胞壁黏肽合成酶
E.|Β-內酰胺酶
正確答案:E
21. 洋地黃毒苷的血漿半衰期為
A.40小時
B.5~7天
C.19小時
D.48小時
E.23小時
正確答案:B
22. 下列哪種強心苷在靜脈給藥時起效最快
A.地高辛
B.洋地黃毒苷
C.鈴蘭毒苷
D.毛花苷C
E.毒毛花苷K
正確答案:E
23. 能干擾DNA拓撲異構酶I的活性，從而抑制DNA合成的藥物是
A.長春堿
B.喜樹堿
C.絲裂霉素
D.羥基脲
E.阿糖胞苷
正確答案:B
24. 環境衛生學的重點研究內容是( )
A.環境因素的調查與監測
B.污染物在環境中的分布與轉歸
C.環境污染治理
D.環境因素的健康效應
E.環境質量評價
25. 高溫車間是指車間內氣溫比室外夏季設計通風計算溫度高2℃以上。關于隨機抽樣，下面哪一個正確
A.隨機抽樣即隨意抽取個體
B.抽樣時精心挑選個體，能使樣本更好代表總體
C.抽樣時應使總體中的所有個體有同等機會被抽取
D.抽樣時樣本量越大越好
E.嚴格執行隨機抽樣，可以避免抽樣誤差
[正確答案]：C
解題思路：隨機抽樣的核心是要使總體中的所有個體都有同等機會被抽取，而A、B、C、D、E選項均為干擾項。
26.下列關于問卷的信度和效度敘述正確的是( D )
A 信度不高，效度不一定不高 B 信度高，效度也高
C 效度不高，信度也不高 D 效度高，信度也高
27.社會醫學研究工具(問卷或量表)的效度評價不包括 ( B )
A 表面效度 B質量效度 C 結構效度 D 內容效度
28.降低腎素活性最強的藥物是
A.可樂定
B.卡托普利
C.普萘洛爾
D.硝苯地平
E.肼屈嗪
正確答案:C
29.急性心肌梗死所致的室性心律失常宜用
A.丙吡胺
B.胺碘酮
C.維拉帕米
D.利多卡因
E.普萘洛爾
正確答案:D
30. 問卷的一般結構包括 (A )
A、封面信——指導語——問題及答案——編碼
B、封面信——指導語——問題——答案
C、封面信——問題——答案——編碼
D、指導語——問題——答案——編碼
31. 生命質量評價的內容是： ( D )
A 生理狀態 B 心理狀態 C 社會交往及主觀滿意度 D以上都包括
32. 主要用于瘧疾病因性預防的藥物是
A.乙胺嘧啶
B.奎寧
C.氯喹
D.青蒿素
E.伯氨喹
正確答案:A解題思路：本題考查抗瘧藥的臨床應用。乙胺嘧啶對原發性紅細胞外期瘧原蟲有抑制作用，是病因性預防首選藥
33. 與胺腆酮抗心律失常機制無關的是
A.抑制K外流
B.抑制Na內流
C.抑制Ca內流
D.非競爭性阻斷β受體
E.非競爭性阻斷M受體
正確答案:E
34. 基因表達調控最重要的環節是
A.基因轉錄
B.DNA合成
C.轉錄后加工
D.蛋白質合成
E.蛋白質合成后加工
35. 進行大氣樣品采集時，用多孔玻板吸收管主要適用于哪種物質( e )。 A.煙
B.粉塵
C.總懸浮顆粒物
D.可吸入顆粒物
E.氣態、蒸氣態和霧態物質
36. 主要作用于S期的抗腫瘤藥是
A.甲氨蝶呤
B.白消安
C.氮芥
D.長春新堿
E.絲裂霉素C
正確答案:A
37. 有關可樂定的敘述錯誤的是
A.中樞性α受體激動藥
B.中樞性α受體阻斷藥
C.可用于偏頭痛和開角型青光眼的治療
D.靜脈注射時可有短暫的升壓
E.降壓作用主要是由于心排出量和外周阻力降低
正確答案:B
38. 體內合成DNA不需要
A.dATP
B.dGTP
C.dCTP
D.dUTP
E.dTFP
39. 用社會醫學研究方法選擇課題時要注意的原則中不包括( C )
A 需要性原則 B 創造性原則 C 特異性原則 D 可行性原則
40. 通過抑制磷酸二酯酶刪的活性而抗慢性心功能不全的藥物
A.地高辛
B.哌唑嗪
C.氨氯地平
D.肼屈嗪
E.米力農
正確答案:E
41. 以下哪項不是定量研究的特點 ( C)
A 標準化程度較高 B 可檢驗性強 C 對研究問題的深層次探索性好 D 精確化較高
42. 大環內酯類對下列哪類細菌無效 A.軍團菌
B.革蘭陰性球菌
C.革蘭陽性菌
D.衣原體和支原體
E.大腸埃希菌和變形桿菌
正確答案:E
43. 下列關于危險度評定論述錯誤的是。
A.對有害因素潛在作用進行定性、定量評價
B.估算在一般接觸條件下可能造成健康損害的概率和程度
C.為制訂法定職業病提供依據
D.尋求可接受危險度
E.預測職業性有害因素的遠期效應
44. 尾蚴皮炎最主要
A.是血吸蟲的尾蚴侵入消化道所致
B.是血吸蟲的尾蚴侵入皮膚所致
C.是血吸蟲的尾蚴侵入呼吸道所致
D.是血吸蟲的尾蚴侵入血液循環所致
E.是血吸蟲的尾蚴侵入皮膚、消化道所致
[正確答案]：B
解題思路：尾蚴皮炎是血吸蟲尾蚴在水田內鉆入人皮膚引起的一種變態反應。
45. 高血壓伴有腎功能不全者宜選用
A.卡托普利
B.利舍平
C.可樂定
D.普萘洛爾
E.胍乙啶
正確答案:A
46. 大多數抗癌藥共有的不良反應是
A.高尿酸癥
B.腎臟損害
C.骨髓抑制
D.肺纖維化
E.心肌損害
正確答案:C
47. 為快速殺菌藥的抗菌藥是
A.萬古霉素和林可霉素
B.萬古霉素和多黏菌素
C.多黏菌素和桿菌肽
D.萬古霉素和替考拉寧
E.紅霉素和林可霉素
正確答案:D
48. 與核蛋白30s亞基結合，阻止氨基酰tRNA進入A位的抗菌藥是
A.四環素
B.鏈霉素
C.慶大霉素
D.氯霉素
E.克林霉素
正確答案:A
49. 環境衛生學主要研究( )
A.自然環境與人群健康的關系
B.生活環境與人群健康的關系
C.自然環境和生活環境與人群健康的關系
D.生活居住環境和自然環境與人群健康的關系
E.自然環境、生活居住環境、工作學習環境與人群健康的關系2.學習環境衛生學的主要目的是使預防醫學專業的學生( )
A.提高診斷疾病的本領
B.認識疾病在人群中流行的原因
C.了解污染物在環境中的分布規律
D.認識全球環境問題
E.認識自然環境和生活環境與人群健康的關系
50. 下列何種抗高血壓藥久用突然停藥，可出現血壓反跳現象
A.肼屈嗪
B.可樂定
C.甲基多巴
D.利舍平
E.引達帕胺
病毒核酸檢測技術范文第5篇
一、工作目標
市內發生局部聚集性疫情時，在市應急指揮部統一領導下，X天內分類分層完成本鎮轄區內村民核酸應急采樣檢測，做到應檢盡檢，愿檢盡檢，全面徹底完成摸排，確保無遺漏、零死角。
二、工作原則
(一)以人為本，生命至上。
把人民群眾生命安全和身體健康放在第一位，把疫情防控作為頭等重要的大事，以高度的政治責任感和使命感，確保規定時間內完成工作任務，使人民群眾在疫情面前切實增強安全感。
（二）統一領導，各負其責。
鎮政府負責核酸篩查檢測總調度，各行政村要強化屬地責任，確保指令清晰有序暢達地執行。必要時提請市疫情指揮部援助。
（三）科學分類，分層實施。
重點人群(醫療衛生機構從業人員、公共領域服務人員、參與重點區域社區防控一線工作人員、學校學生及教職員工等)優先;擴大人群(常住居民)愿檢盡檢。
（四）合理選點，規范有序。
原則上按照大型空曠室外場地，遠離人群密集區，利于通風等要求選擇采樣點。每個采樣點應采取硬隔離封閉，設進出口各一個，配有臨時網絡和電源。內部應劃分等候區、登記區和采樣區，醫護人員的采樣位置處于上風向;各區均應落實1米線要求，防止人員集聚。
三、組織機構
鎮政府建立應急核酸檢測工作領導小組，負責采樣點位選擇設置、采樣點設施配備、檢測對象的排查、宣傳動員、通知催檢及檢測結果告知。下設組織動員、現場采樣、后勤保障組，具體如下：
1.工作領導小組
組
長：
副組長：
成
員：
2.
組織動員組
組
長：
副組長：
成
員：
聯絡員：
負責統籌開展底數摸查，收集核實個人身份信息，建立統一完整的工作臺賬，做到數據準、底數清、情況明。負責通知人員到采樣檢測點接受采樣，通知方式以上門敲門通知為主，電話、手機短信、網格排查等方式為輔，確保“應檢盡檢”不遺漏，全部通知到位。
3.現場采樣組
組
長：
成
員：
負責采樣人員安排、現場采樣、采樣耗材準備等。
4.后勤保障組
組
長：
副組長：
成
員：
第一組：現場消毒組
組長：
組員：
工作職責：采樣結束后的環境消毒等;醫療垃圾運走前消毒。
第二組：后勤保障組
組長：
組員：
負責采樣點設施設備購置配備、安裝更新;負責制作采樣點各類標識、工作流程圖、工作制度，做到醒目統一;負責協調供水、供電、防暑防寒;負責工作人員食宿生活保障;負責檢測試劑、防護物資購置配備;負責醫療廢棄物處置;負責安排專人駐扎采樣點，做到后勤保障隨要隨到，提前最快到位，防范卡、慢、推、拖。
四、現場采樣
1.秩序維護組
負責與動員組做好對接，負責接收檢測對象;維持檢測等候區秩序;協助引導員做好人員分組;安排檢測對象分組等候，避免人員扎堆;在現場設置警戒線，防止車輛、無關人員進入工作區域。
2.人員引導組
負責將檢測對象按1人、5人或10人一組進行分組，并引導到登記區;落實社交距離。負責引導已登記對象到采樣區采樣;安排非XX戶籍對象掃碼登錄信息系統錄入個人信息;落實1米線要求。
3.現場采樣組
由信息登記員、采樣員和采樣協助員等組成，負責監測對象的登記、采樣等工作。其中：信息登記員負責確定采樣對象組號，完成檢測對象補充信息調查(手機、現住址等)，并錄入信息系統;打印檢驗條碼;采樣員負責咽拭子采集;按規做好樣品儲存;與樣品轉運員做好樣品交接工作;采樣協助員負責準備好采樣工具、為采樣管編號、協助采樣員采集樣品，必要時對可能被污染的物品進行消毒。
3.樣品轉運組
負責定時收集各采集點位已采集樣品，按規定轉運至指定檢測點(集中轉運點);做好樣品轉運箱的流轉;不得利用公共交通轉運樣品，確保專車轉運。
4.后勤保障組
負責采樣點設施設備購置配備、安裝更新;負責制作采樣點各類標識、工作流程圖、工作制度，做到醒目統一;負責協調供水、供電、防暑防寒;負責工作人員食宿生活保障;負責檢測試劑、防護物資購置配備;負責醫療廢棄物處置;負責安排專人駐扎采樣點，做到后勤保障隨要隨到，提前最快到位，防范卡、慢、推、拖。
病毒核酸檢測技術范文第6篇
一、工作目的
進一步做好秋冬季節新冠肺炎疫情防控工作，提高處置新冠肺炎疫情的能力，培養專業處置衛生應急隊伍，實現全民核酸檢測，排除可能存在的發病風險，提高全民防范意識，確保人民身體健康。
二、組織保障
成立XX鎮XX社區全民核酸采樣工作領導小組，具體成員如下:
組
長:
副組長:
成
員:
領導小組下設工作專班，由社區其他兩委班子成員與衛生院相關負責人具體對接落實。
三、核酸檢測要求
當日采樣檢測量約XX人份，五天內完成社區所有民眾的核酸采樣工作，一周內完成所有核酸檢測工作。
四、工作開展
1.集中采樣點設置在XXX鎮衛生院。每個區域標識醒目，臨時隔離區遠離其他區域，避免污染。
2.采樣點現場布局圖示:(略)
3.物資準備:按50人的檢測量，配備晴雨兩用帳篷10頂、測溫儀1臺、桌8張、椅12把、電源插座10個、備用口罩200只、音箱1個、小喇叭2個、防護服及隔離衣各10套、面罩10個、恒溫槍2把、水銀體溫計2盒、干手消、橫幅、濕紙巾和登記用品若干。
4.采樣工作要求:采集樣品當天送市疾病預防控制中心進行檢測，按規范做好樣品的保存、運輸、送檢、接收工作。
五、分組情況
1.物資保障組:負責采樣所需的各類物資保障，第一時間送達采樣現場。(衛生院)。
2.社區發動組:組織現場工作人員，做好宣傳工作，通知到社區居民(50名)，保障檢測點環境安全有序。(XX社區)
3.對外聯絡組:負責聯絡場地，現場勘查，與衛健局、疾控中心對接，內外協調，保障各節點環環相扣，形成工作閉環。(衛生院)
六、職責分工
(1)社區負責采樣工作宣傳，受檢人員組織，受檢人員信息收集、登記，樣品條碼分發，采樣地點設置安排、采樣后現場消毒等相關工作。
(2)衛生院負責樣品采集、樣品保存、樣品送檢、現場消毒技術指導和醫療廢棄物處理等相關工作。
(3)派出所、平安協會負責現場秩序維護和應急情況處置。