糖尿病是一種因胰島素絕對或相對不足,或者靶細胞對胰島素敏感性降低引起的以糖代謝紊亂為主的慢性綜合性疾病,其中II型糖尿病的發生是外周胰島素抵抗和β細胞功能缺陷共同作用的結果[1]。
鹽酸二甲雙胍是目前全球應用最廣泛的口服降糖藥之一,近年來雖然有多個新型降糖藥物上市,但二甲雙胍仍是全球使用量迅速增加的經典口服降糖藥物。二甲雙胍有良好的單獨和聯合治療的療效和安全性證據,以及心血管并發癥預防等方面明確的臨床資料。因此,該藥已經成為全球控制糖尿病的核心藥物。鹽酸二甲雙胍片它可使糖尿病患者血糖及糖化血紅蛋白降低,能促進靶組織胰島素受體增加,增加機體對胰島素的敏感性,減輕胰島素抵抗及飯后高胰島素血癥,對服用磺酰脲類降糖藥無效的糖尿病病人亦有效。國內外主要糖尿病治療指南均建議,無論對于超重還是體重正常的糖尿病患者,除非存在禁忌癥或無法耐受,否則都應從一開始就使用二甲雙胍治療,且聯合治療的方案中都應包括二甲雙胍,這體現了該藥在糖尿病治療領域的重要地位[2]。目前鹽酸二甲雙胍片在全世界多個國家都有上市,在國內鹽酸二甲雙胍普通片已收載于中國藥典2015版第二部,屬于國家基本藥物的甲類品種[3]。鹽酸二甲雙胍片不但有降血糖作用,還可能有減輕體重和高胰島素血癥的效果。
本研究過程中,對原處方工藝進行了優化,確定采用玉米淀粉為稀釋劑、低取代羥丙纖維素為崩解劑和聚維酮K90為粘合劑,采用三相攪拌制粒工藝,完成了處方和工藝研究。自制制劑和參比制劑采用不同pH的四種溶出介質進行體外相似性評價,并進行了餐前和餐后生物等效性試驗,結果表明自制制劑和參比制劑具有生物等效性。
1.材料和方法
(1)儀器和試藥
紫外分光光度儀,美國安捷倫公司(型號:Cary 60);溶出度儀,上海富科思公司(型號:FADT-801RC);電子天平,梅特勒公司(型號:XPE205);鹽酸二甲雙胍原料藥:批號180101;鹽酸二甲雙胍片自制制劑:批號190501、 190502、190503(規格0.25g),參比制劑:日本新薬株式會社(グリコラン錠250mg),批號A801。
(2)體外評價方法
①溶出度測定條件
以水900ml為溶出介質,轉速為每分鐘50轉,依法操作,經15分鐘時,取溶出液適量,用0.45μm濾膜濾過后,精密量取續濾液1ml,置50ml量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。對照品溶液的制備:精密稱取鹽酸二甲雙胍對照品約14mg,置100ml量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取2ml,置50ml量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。取對照品溶液和供試品溶液,照紫外分光光度法,以水為空白溶液,在233nm的波長處測定吸光度,計算每片的溶出量。
②溶解度測定
鹽酸二甲雙胍的pka值為12.4,參照《普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則》[4]的相關內容,選擇pH1.0、pH2.0鹽酸溶液、pH3.8、pH4.5醋酸鹽溶液、pH5.8、 pH6.8、pH8.0磷酸鹽溶液以及水共8種介質進行溶解度測定。取原料藥各2.0g,分別加入10ml介質中,37℃±1℃振搖1小時,觀察其溶解情況。
③不同介質中穩定性比較
為考察樣品在溶出介質中穩定性,著重對pH1.2鹽酸溶液、pH4.0醋酸鹽溶液、pH6.8磷酸鹽溶液以及水4種介質進行了穩定性測定。
照溶出度測定法,以各考察介質900ml為介質,轉速擬定為每分鐘50轉,依法操作,經15分鐘時取溶出液,分別于0、1、2、3、4、6和24小時,按照1.2.1項下方法進行吸光度測定。
④溶出參數確定
參考中國藥典2015年版二部、日本IF資料(2016年)和日本溶出數據庫收載試驗方法,所使用的裝置與轉速均不相同,在比較二者溶出度時,應著重對溶出裝置和轉速進行考察。
(3)體內評價方法
以日本新薬㈱公司的鹽酸二甲雙胍片為參比制劑,以自制片為受試制劑。通過單中心、隨機、開放、單次給藥、兩周期、雙交叉臨床研究來評價兩種制劑空腹狀態下的人體生物等效性。并按照國家藥品監督管理局臨床試驗規范要求及《生物樣品定量分析方法驗證指導原則》[5]進行了相關的方法學驗證,包括標準曲線制定、精密度和準確度試驗、選擇性試驗、提取回收率和待測物穩定性試驗等。
根據《藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗指導原則》[6]和《以藥動學參數為終點評價指標的化學藥物仿制藥人體生物等效性研究技術指導原則》[7]以及參比制劑與自制制劑的藥品說明書的相關內容,所有試驗受試者在餐前或餐后,每個周期服藥前0h及服藥后15min、30min、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、4h、6h、8h、10h、12h、16h和24h分別抽取靜脈血約3ml,采用LC-MS/MS法,定量檢測血漿中的二甲雙胍的濃度,該方法具有靈敏度高、選擇性好、分析速度快和使用范圍廣等特點。
2.結果
(1)體外評價
①溶解度測定
鹽酸二甲雙胍原料在pH1.0、pH2.0鹽酸溶液、pH3.8、 pH4.5醋酸鹽溶液、pH5.8、pH6.8、pH8.0磷酸鹽溶液以及水8種介質各介質中都呈現易溶現象,滿足本次溶出度試驗條件。
②在各pH介質中的穩定性
根據試驗測定結果,以水為溶出介質,供試品溶液(n=6)分別放置0、1、2、3、4、6和24小時,吸光度均無明顯變化,RSD小于0.4%;以磷酸鹽緩沖液(pH6.8)為溶出介質,RSD小于0.4%;以醋酸鹽緩沖液(pH4.0)為溶出介質,RSD小于0.3%;以鹽酸溶液(pH1.2)為溶出介質,RSD小于0.5%;結果顯示各pH介質供試品溶液在室溫條件下,24小時內可保持穩定。
③裝置的選擇
取自制制劑(190501批)及參比制劑(A801批)各6片,照溶出度和釋放度測定法第一法或第二法,以水900ml為溶出介質,轉速初步設定為50rpm,分別經5min、10min、15min、20min、30min、45min時,取出溶出液,按照1.2.1項下方法進行吸光度測定,考察各時間點的累積溶出量。
結果在第一法與第二法條件下,自制制劑與參比制劑體外溶出行為基本一致,鑒于日本橙皮書中溶出度測定采用的是槳板法(第二法),因此優先選擇該法進行測定。
④轉速的考察
取自制制劑(190501批)及參比制劑(A801批)各6片,以水900ml為溶出介質,轉速分別為每分鐘30轉、50轉和75轉,分別經5min、10min、15min、20min、30min、45min時,取樣按照1.2.1項下方法測定吸光度,結果表明三種轉速條件下自制制劑與參比制劑體外溶出行為基本一致,而溶出速率也隨著轉速的增加而上升,在10分鐘時,三種轉速下的溶出度均達到溶出平臺,每分鐘50轉時與人體腸胃蠕動更為相近,也最具有區分力,因此溶出轉速選擇為每分鐘50轉。
⑤參比制劑和自制制劑的溶出曲線
根據溶出度試驗方法學研究結果,采用自制制劑與參比制劑在0.1mol/L鹽酸溶液、pH4.5醋酸鹽溶液、pH6.8磷酸鹽溶液以及水四種介質中進行溶出曲線對比。在四種介質中,15min時的溶出量均大于85%,根據CDE發布的《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》要求,判定自制樣品和參比制劑體外溶出行為相似。
(2)體內評價
①空腹試驗
受試者單次空腹口服鹽酸二甲雙胍片受試制劑和參比制劑的藥動學參數Cmax分別為764.3±124.63ng/mL和757.5±145.33ng/mL,AUC0-t分別為4470.3±539.14h*ng/mL和4502.3±710.86h*ng/mL,AUC0-∞分別為4543.5±554.89h*ng/mL和4576.0±718.90h*ng/mL。最終采用符合方案的28例受試者的藥代參數結果評價受試制劑和參比制劑等效性結果,結果顯示:受試制劑/參比制劑Cmax、AUC0-t、AUC0-∞幾何均數的比值分別為101.75%、100.05%、100.00%,其90%置信區間分別為97.70%～105.96%、96.76%～103.45%、96.75%～103.37%,均落在80.00%～125.00%之間,表明鹽酸二甲雙胍片自制制劑與參比制劑在空腹給藥時生物等效。
②餐后試驗
受試者單次餐后口服鹽酸二甲雙胍片受試制劑和參比制劑的藥動學參數Cmax分別為449.7±108.59ng/mL和425.6±82.98ng/mL,AUC0-t分別為3459.7±656.77h*ng/mL和3409.4±749.79h*ng/mL,AUC0-∞分別為3532.7±666.55h*ng/mL和3491.9±770.52h*ng/mL。最終采用符合方案的29例受試者的藥代參數結果評價受試制劑和參比制劑等效性結果,結果顯示:受試制劑/參比制劑Cmax、AUC0-t、AUC0-∞幾何均數的比值分別為104.69%、102.23%、101.96%,其90%置信區間分別為100.15%～ 109.43%、99.13%～105.42%、98.90%～105.11%,均落在80.00%～125.00%之間,表明鹽酸二甲雙胍片自制制劑與參比制劑在餐后給藥時生物等效。
3.討論
口服固體制劑進入體內后,首先在胃腸液中溶出才能被有效吸收并到達體循環,藥物在體內的釋放和吸收直接影響其藥效。溶出度試驗是模擬口服固體制劑在胃腸道中崩解和溶出較理想的體外試驗法,也是評價和控制藥品固體口服制劑質量的重要指標。然而目前藥典中采用的多為一點式判斷方法,不能較真實的反應實際溶出狀況。同時口服固體制劑還受處方和制劑工藝等因素的影響,優化的工藝也是保證藥物良好溶出的基礎。通過對鹽酸二甲雙胍片體外溶出度試驗,包括對溶出度測定條件、溶解度測定、不同介質中穩定性比較、溶出裝置和轉速條件的篩選,表明自制制劑與參比制劑體外溶出度具有相關性;以及與參比制劑進行了完整的臨床試驗,表明自制鹽酸二甲雙胍片與參比制劑呈現生物等效性,本次研究工作對于優化已上市固體制劑產品的處方工藝研究亦具有較大的指導意義。未來上市后的產品可采用溶出曲線來評價工藝執行和偏離程度,以保證人民用藥安全和用藥有效。
摘要：目的:研究鹽酸二甲雙胍片體外溶出度試驗,并達到體內與參比制劑生物等效。方法:通過對溶出度試驗方法深入研究,確定不同pH溶出介質的檢測方法和要求。結果:自制制劑與參比制劑的溶出度基本一致,人體內餐前和餐后試驗呈現一致性。結論:經過對自制鹽酸二甲雙胍片溶出度和生物等效研究,自制制劑和參比制劑具有質量和療效一致性。
關鍵詞：鹽酸二甲雙胍片,溶解度測定,制劑
參考文獻
[1] 鄭文巧,II型糖尿病藥物治療進展[J].哈爾濱醫藥,2012,32(1):56-57.
[2] 母義明,紀立農,寧光等,鹽酸二甲雙胍臨床應用專家共識(2016年版)[J].中國糖尿病雜志,2016,24(10):871-884.
[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2015年版二部[M].北京:中國醫藥科技出版社,2015:1508.
[4] NMPA.普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則.
[5] NMPA.生物樣品定量分析方法驗證指導原則.
[6] NMPA.藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗指導原則.
[7] NMPA.以藥動學參數為終點評價指標的化學藥物仿制藥人體生物等效性研究技術指導原則.[EB/OL].[2015-11-27].