IgA腎病在我國約占原發腎小球疾病的1/3, 也是導致終末期腎病的常見病因之一, 當前認為遺傳因素與該病的易感性有關, 并影響疾病的發生和發展。國內學者在IgA腎病患者及其家庭成員中采用傳遞不平衡檢驗 (transmission disequili-brium test, TDT) 和單倍體相對風險 (haplotype relative risk, HRR) 分析法對megsin基因3'端非翻譯區的C-2180T區的基因多態性進行分析研究后發現, C-2180T區的等位基因明顯是由雜合親代傳向子代患者, 且這個等位基因共同傳遞的比率明顯增加, 說明megsin基因的變異性與IgA腎病發生的易感性相關[1]。本文用PCR-RFLP法及基因測序法鑒定基因型, 采用病例對照研究的方法, 探討了蘭州地區漢族人群IgA腎病中C-25663G基因多態性分子遺傳學意義。
1 對象與方法
1.1 對象
1.1.1 IgA腎病組
解放軍第一醫院心腎科經皮腎穿刺活檢證實為IgA腎病的蘭州地區漢族的患者44例 (男23例, 女21例) , 年齡 (10～49) 歲, 平均 (32±5) 歲。IgA腎病病理診斷標準采用2001年全國腎活檢病理診斷標準[2]。均排除繼發性腎臟疾病和其他合并癥及并發癥。
1.1.2 正常對照組
解放軍第一醫院100名 (男72名, 女28名) 體檢正常的蘭州地區漢族健康人群, 年齡 (19～46) 歲, 平均 (23±4) 歲。
1.2 基因組DNA的提取
采用QIAamp (r) DNA試劑盒從EDTA抗凝200μL外周靜脈血中提取基因組DNA。
1.3 Megsin基因C-25663G基因鑒定
應用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態性 (poly-merase chain react ion-restrict ion fragment length polymorphism, PCR-RFLP) 方法做基因型鑒定。上下游引物分別為5'-GCT CAG ATA CAA TGG TGG CATA-3'和5'-GCT GAC ATT TGA GAG TTC CA-3' (美國生命技術公司合成) 。PCR反應條件:95°C預變性15s, 94°C變性30s, 51退火15s, 72°C延伸30s, 共35個循環, 最后72°C延伸5min。PCR反應體積為30μL。產物用限制性內切酶Hinf I (Promega公司) 37°C消化6h以上或過夜, 2%瓊脂糖凝膠電泳確定基因型。
注:IgA腎病組與正常組比較, P<0.01
1.4 統計學處理
統計學分析經遺傳平衡檢測證明, IgA腎病患者與對照組均符合Hardy-Weinberg平衡, 具有群體代表性。應用SPSS 13.0統計軟件進行分析。所有統計分析中, P<0.05認為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 Megsin基因C-25663G基因鑒定
酶切后, 等位基因CC型產生200、117bp2條片段;CG型產生317、200、117bp3條片段;GG型產生317bp1條片段, 見圖1。
2.2 Megsin基因C-25663G基因多態性檢測結果
基因分布CC型者28例, CG型者12例, GG型者4例, 等位基因C型68例, G型20例, 與正常對照組基因分布相比, 均無統計學意義 (P<0.01) , 見表1。
3 討論
我們以往的研究發現, Megsin基因3'端非翻譯區C-2093T和C-2180T多態性與中國漢族人群IgA腎病的發生顯著相關[3]。國內學者應用PCR-RFLP方法鑒定IgA腎病患者基因型, 用以家庭為基礎的傳遞不平衡檢驗 (TDT) 、單倍型相對危險度 (HRR) 分析結合病例對照研究方法, 首先分析Megsin基因C-25663G多態性與我國漢族人群IgA腎病發生的關系, 結果顯示, Megsin基因C-25663G多態性與中國漢族人群IgA腎病的發生及病情進展無關[4]。但由于基因多態性研究多受人群、地域、標本量、研究方法等多方面影響, 單一的研究結果無明顯的參考價值。
本研究用PCR-RFLP法鑒定基因型, 采用病例對照研究的方法, 探討蘭州地區漢族人群IgA腎病中C-25663G基因多態性分子遺傳學意義。研究結果顯示, IgA腎病基因分布CC型者28例 (63.63%) , CG型者12例 (27.27%) , GG型者4例 (9.09%) , 等位基因C型68例 (77.27%) , T型20例 (22.73%) , 與正常對照組基因分布相比, 均無統計學意義 (P<0.01) 。研究結果提示Megsin基因C-2093T多態性與IgA腎病的發病可能無關, 此結果和夏運風教授研究結果相似, 但這個研究結果對IgA腎病的發病機制、臨床用藥, 以及未來基因監測和基因治療將具有重要的指導意義。
摘要：目的 研究蘭州地區漢族人群Megsin基因C-25663G多態性與IgA腎病的關系。方法 采集蘭州地區漢族的IgA腎病患者44例及體檢正常的蘭州地區漢族健康體檢人群100例作為對照組的Megsin基因C-25663G, 應用聚合酶鏈反應 (PCR) 進行檢測和分析。結果 IgA腎病組與健康對照組的Megsin基因C-25663G多態性檢測結果顯示, CC基因型、CG基因型、GG基因型和C型、T型等位基因型均沒有顯著性差異 (P<0.01) 。結論 Megsin基因C-25663G多態性與蘭州漢族人群IgA腎病的發病可能無關。
關鍵詞：IgA腎病,Megsin基因,聚合酶鏈反應
參考文獻
[1] Li YJ, Du Y, Li CX, et al.Family-based association study showing that immunoglobul in A nephropathy is associated with the poly-morphisms2093C and2180T in the3'untranslated region of the Megsin gene[J].J Am Soc Nephrol, 2004, 15:1739～1743.
[2] 全國腎活檢病理研討會.腎活檢病理診斷標準指導意見[J].中華腎臟病志, 2001, 17:270.
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[4] Miyata T, Nangaku M, Suzuk iD, et al.Amesangium predominantgene, megsin, is a new serp in up regulated in IgA nephropathy[J].J Clin Invest, 1998, 102 (1) :828～836.