卡非佐米, 是一種蛋白酶體抑制劑, 適用為治療多發性骨髓瘤患者。用于治療預先接受過至少2種藥物治療, 并有證據顯示在完成末次治療后60天內疾病惡化的難治性多發性骨髓瘤。本文采用高效液相色譜法測定卡非佐米的含量, 該方法簡單、快捷、重復性較好。
1儀器與試藥
Agilent1260型高效液相色譜儀及其色譜工作站, 紫外檢測器檢測 (VWD) ?？ǚ亲裘坠ぷ鲗φ掌?(重慶泰濠制藥) , 卡非佐米樣品 ( 重慶泰濠制藥:CAR~1412001、CAR~1412002、CAR~ 1412003) , 乙腈 (色譜純) , 磷酸氫二鉀 (分析純) , 純化水。
2. 方法與結果
2.1色譜條件
Agilent的Extend~C18反相色譜柱 (4.6mm×250mm, 5μm) , 以乙腈~0.01mol/L磷酸二氫鉀緩沖液 (p H=6.0) (65:35) 為流動相, 流速為1.0 m L/min , 用紫外檢測器檢測, 檢測波長210nm, 柱溫30℃。
2.2溶液的制備
2.2.1對照品溶液的配制:精密稱取卡非佐米工作對照品25mg, 置25ml容量瓶中, 加乙腈溶解并稀釋至刻度。
2.2.2供試品溶液的配制:精密稱取卡非佐米供試品25mg, 置25ml容量瓶中, 加乙腈溶解并稀釋至刻度。
2.3系統適用性試驗
精密量取上述對照品溶液進樣, 卡非佐米的出峰時間在36min左右, 理論板數在5000以上, 拖尾因子為1.02, 卡非佐米與相鄰雜質色譜峰的分離度大于1.5;對照品溶液連續進樣5次, 卡非佐米峰面積的RSD為0.24%, 符合中國藥典的要求。
2.4線性范圍
精密稱取卡非佐米對照品25 mg, 置25m L量瓶中, 加乙腈溶解并稀釋至刻度, 搖勻, 作為卡非佐米對照儲備液。精密量取上述儲備液配制卡非佐米工作對照品系列溶液, 濃度分別為1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、0.14μg/m L。精密量取對照品系列溶液10μL, 進樣測定, 以濃度X對峰面積 (y) 線性回歸, 得到卡非佐米標準曲線方程為:Y=21.416X+0.037 (r=0.99948) 。這表明卡非佐米在0.14~1.2μg/m L峰面積和濃度呈現良好的線性關系。
2.5重復性試驗
精密稱取卡非佐米 (批號為CAR~1412003) 25mg (7份) , 置25m L量瓶中, 加乙腈溶解并稀釋至刻度, 搖勻, 按上述色譜條件進樣測定, 外標法計算含量, 結果RSD為0.83% (n7) 。
2.6準確度試驗
精密稱取已經確定含量的卡非佐米工作對照品, 測定卡非佐米工作對照品在濃度為0.8mg/ml、1.0mg/ml、1.2mg/ml時, 對照品中的卡非佐米含量, 每份濃度配制三份樣品, 計算含量測定的準確度和回收率。九份樣品測定得回收率平均值為99.8%, 含量的RSD為0.22%。
3討論
3.1本色譜方法中, 用前充分平衡色譜柱以及柱溫的選擇是有效分離的關鍵。Extend~C18反相色譜柱使用前需用流動相 (水:乙腈=80:20) 沖洗, 使用后同樣用該流動相沖洗色譜柱, 否則會出現色譜系統壓力過高, 卡非佐米與雜質不能完全分離。
3.2本研究中, 對比了不同濃度的磷酸鹽緩沖液和不同p H值的磷酸鹽緩沖液, 結果發現0.01mol/L磷酸二氫鉀緩沖液調節p H為6.0時, 對卡非佐米和雜質的出峰情況效果最好。通過對卡非佐米溶液進行紫外掃描, 發現卡非佐米的最大吸收波長為210nm, 因此色譜方法中的波長定為210nm。
4結語
本文建立了優化的卡非佐米含量測定的HPLC法, 并對該方法進行了完整的方法學驗證。通過以上試驗結果表明, 所建方法系統適用性、線性范圍、準確度和重復性均符合要求, 能夠準確地對卡非佐米進行含量測定的分析, 可為卡非佐米質量控制和質量標準的建立提供可靠手段。
摘要：目的:建立原料藥卡非佐米有關物質及含量測定的HPLC法。方法:用Agilent的ExtendC18反相色譜柱 (4.6mm×250mm, 5μm) , 以乙腈0.01mol/L磷酸二氫鉀緩沖液 (p H=6.0) (65:35) 為流動相, 流速為1.0 m L/min, 用紫外檢測器檢測, 檢測波長210nm, 柱溫30℃。結果卡非佐米在0.141.2μg/m L呈良好的線性關系 (r=0.99948) , 重復性RSD為0.83% (n=7) , 卡非佐米的平均回收率為99.9%, RSD為0.22% (n=9) 。結論 方法快速、簡便, 結果準確、可靠, 可用于卡非佐米的含量測定。
關鍵詞：卡非佐米,高效液相色譜法,含量
參考文獻
[1] 霍秀穎, 封宇飛.蛋白酶體抑制劑卡非佐米的藥理作用與臨床評價[J].中國新藥雜志, 2013 (13) .
[2] 陳小燕, 張建中, 倪海華, 胡征, 鄒愛峰.卡非佐米的藥理學及臨床研究進展[J].中國抗生素雜志, 2015, (09) .