大腸桿菌作為人和動物腸道內正常菌群成員之一, 人和動物出生后數小時即可經口進入消化道后段, 大量繁殖而定居, 終生伴隨, 并經糞便不斷散播于周圍環境。故大腸桿菌在環境衛生和食品衛生學上, 常被用作糞便直接或間接污染的檢測指標。本菌還是分子生物學和基因工程中重要的實驗材料和研究對象[1]。
隨著大型集約化養畜 (禽) 業的發展, 致病性大腸桿菌對畜牧業所造成的損失已日益明顯。其發病率和死亡率因各地區的飼養條件和衛生防治措施等不同而有很大差異。大型集約化養畜 (禽) 場密度過大、通風換氣不良、飼養管理及環境消毒不徹底, 是加速本病流行不容忽視的因素。除此之外, 近十幾年來在畜牧養殖中, 為了控制大腸桿菌及某些細菌感染, 在飼料添加劑及治療中盲目的使用一些抗菌藥物, 常導致大腸桿菌菌株產生耐藥性。本文擬研究主要是對貂的大腸桿菌進行診斷與治療。通過流行病學調查、臨床檢查和剖檢變化初步診斷為大腸桿菌;通過室驗室檢查、動物實驗、等進一步確診為大腸桿菌。其目的是為了控制和防治大腸桿菌病, 以降低養殖業中因大腸桿菌而造成的經濟損失。
1 材料與方法
1.1 材料
(1) 病料。石家莊市正定某狐貂養殖場死亡的和即將死亡的仔貂, 無菌采取其心、肝、脾、腎。
(2) 培養基。普通營養肉湯 (批號2006115) 、普通營養瓊脂 (批號2005125) 、麥康凱瓊脂 (批號2006049) 、伊紅美藍瓊脂 (批號2005403) 、SS瓊脂 (批號20060212) 。以上培養基均由由杭州天和微生物試劑有限公司生產, 由河北省預防獸醫學重點試驗室提供。
(3) 試劑。染色試劑革蘭氏染色液由臨床實驗室提供。
(4) 儀器設備。顯微鏡、恒溫培養箱、超凈工作臺、高壓滅菌鍋等均由河北省預防獸醫學重點實驗室提供。
(5) 實驗動物。由北戴河試驗動物養殖場購買的20日齡的健康小白鼠10只。
1.2 方法
(1) 流行病學調查。主要通過問診了解發病的情況, 通過實地調查了解飼養管理情況、飼料、溫度、濕度等環境因素。
(2) 臨床癥狀及剖檢癥狀。主要通過主訴及現場觀察和簡易檢查;通過剖檢觀察內臟器官的變化。
(3) 實驗室檢查。
(1) 微生物形態學觀察。無菌采取心、肝、脾等病料進行觸片, 革蘭氏染色后鏡檢。
(2) 分離培養。將采集的病料分別接種于麥康凱瓊脂平板、營養瓊脂平板、伊紅美藍瓊脂平板、SS瓊脂平板上, 于37℃恒溫箱內培養24h, 觀察并記錄菌落的特征。后挑取單個可疑菌落接種于營養肉湯中, 于37℃恒溫培養箱內培養24h后觀察變化情況;并從麥康凱瓊脂平板上挑取可疑單個菌落接種于普通營養瓊脂斜面, 于37℃培養箱內培養24h, 保存菌種用于下一步的生化試驗;除此之外, 挑取單個可疑菌落涂片、革蘭氏染色后鏡檢觀察。
2 結果與分析
2.1 臨床癥狀及剖檢變化
(1) 臨床癥狀。以斷乳后的仔貂發生最多, 成年貂很少發生, 散發性流行。潛伏期2~5d。初期糞便稀軟, 呈黃色周狀, 隨后下痢加劇, 糞便呈灰白色, 帶有粘液和泡沫。體溫升高達40℃~41℃。有時伴有嘔吐。糞便中有條狀血液和未消化飼料。嚴重的發生水瀉, 肛門失禁, 呼吸、心跳加快。病貂迅速消瘦、弓腰、眼下陷、乏力, 臨死前體溫下降。
2.2 剖檢變化
剖檢可見胃腸有卡他性或出血性炎癥變化, 腸系膜淋巴結腫大、充血、出血, 脾臟腫大, 腎柔軟, 心肌變性。
2.3 分離培養
在營養瓊脂平板上37℃培養24h后, 形成圓形凸起、光滑、濕潤、半透明、灰白色菌落, 直徑在2mm~3mm;在麥康凱瓊脂平板上, 形成中等大小、表面光滑濕潤的紅色菌落;在伊紅美藍瓊脂平板上產生黑色金屬閃光的菌落;在SS瓊脂平板上生長較差;在營養肉湯中培養24h后, 呈均勻混濁、管底有粘性沉淀, 液面管壁有菌環。
2.4 試驗組結果
試驗組 (第一組) 小鼠4只24h內死亡, 1只36h內死亡。剖檢可見肝臟腫大、有出血點和壞死點、腸嚴重鼓氣、心包淤血、肺出血、脾臟淤血。無菌采取試驗組小鼠的心、血、肝和脾接種在普通瓊脂平板及普通營養肉湯中, 于37℃培養24h, 有細菌生長。革蘭氏染色及生化鑒定表明此菌與接種細菌為同種細菌, 表明該菌對小鼠具有較強的致病力。
2.5 治療
分別選用頭孢哌酮和磺胺甲噁唑兩種藥物, 其中頭孢哌酮按每公斤體重0.04g~0.08 g, 肌肉注射;磺胺甲噁唑按每公斤體重0.05g~0.06g, 口服給藥, 每天早晚各一次, 連用三天。經過治療收到了良好的效果, 除了并重的仔貂沒有恢復, 其它均基本康復。
3 小結與討論
3.1 診斷結果
通過實驗室檢查, 該菌在普通培養基上生長良好, 形成圓形凸起、光滑、濕潤、半透明、灰白色菌落;在麥康凱瓊脂上形成紅色菌落;在伊紅美藍瓊脂上產生黑色帶金屬閃光的菌落;在SS瓊脂上生長較差;本菌能夠迅速發酵乳糖、葡萄糖、麥芽糖、甘露醇, 不產生硫化氫, 吲哚試驗和甲基紅試驗均為陽性, V-P試驗為陰性, 以上試驗可以確診為該病原為大腸桿菌。
3.2 防制
大腸桿菌是條件致病菌, 所以防制該病的關鍵在于加強對貂群的飼養管理, 特別是產仔及育成期更應注意。仔貂要盡快吃到初乳, 母貂產仔過多時要及時代養, 在正常情況下, 日糧中可不加抗生素添加劑, 在幼貂斷奶后開始補給, 每3天補1次, 能收到良好的效果。
摘要：貂大腸桿菌病是由大腸埃希氏菌的某些致病血清型引起的一類疾病的總稱。主要臨床癥狀為發病急劇, 死亡率高。無菌條件下采取病死仔貂的心臟、肝臟、脾臟、腎臟進行病原菌的分離、鑒定、藥敏試驗、生化試驗和動物回歸試驗等。結果表明引起該貂場仔貂發病的病原為致病性大腸桿菌, 并且該菌對小白鼠有較強的致病力。根據試驗結果可得出, 大腸桿菌對仔貂危害嚴重, 而且易產生耐藥性, 平時應合理的預防和治療。
關鍵詞：仔貂,大腸桿菌,分離鑒定
參考文獻
[1] 陸承平.獸醫微生物學[M] (第3版) .中國農業出版社.
[2] 蔡寶祥.家畜傳染病學 (第4版) [M].中國農業出版社.
[4] 刁有祥, 李久芹, 陳慶普.山東省雞大腸桿菌的分離及鑒定[J].中國預防獸醫學報.
[5] 張振興, 高素蘭.貂病調查及防制的研究[J].畜牧與獸醫.
[6] 劉淑范, 忠乃.水貂類大腸桿菌病的病原診斷報告[J].中國獸醫雜志.
[7] 邢蘭君.水貂大腸桿菌病的診斷與治療[J].農村養殖技術.