螺旋藻是一種廣泛使用的保健食品。中醫認為, 螺旋藻甘淡而平, 不寒不熱, 既能扶正又不戀邪, 祛邪而不傷正, 補瀉兼備, 調整機體陰陽, 使臟腑經絡功能恢復正常[1], 是不可多得的天然保健品?，F代醫學研究證實, 螺旋藻能促進腸道益生菌的增殖[2,3], 近年來, 大量研究表明, 腸道菌群與多種疾病直接相關[4,5,6], 正常腸道菌群平衡與人體健康密切相關。而濫用抗生素能導致的腸道菌群紊亂[7], 本文通過制造抗生素相關性腹瀉小鼠模型, 研究螺旋藻對腸道菌群的影響。
1 材料與方法
1.1 實驗動物
近交系BALB/C小鼠, 昆明種小鼠40只, 體質量18~22 g。
1.2 藥物
市售山東天健螺旋藻粉;注射用氨芐青霉素 (山東魯抗醫藥) 。
1.3 培養基
EMB培養基:腸桿菌培養基;BDS培養基:擬桿菌培養基;TPY瓊脂培養基:雙歧桿菌培養基;TSC培養基:產氣莢膜梭菌培養基;改良MC培養基:乳桿菌培養基。均購自青島海博生物技術有限公司。
1.4 儀器設備 (見表1)
1.5 動物分組
所有小鼠進行一周適應性飼養后, 于實驗前禁食6 h (自由飲水) 。小鼠隨機分成4組:正常組、模型組、生理鹽水對照組和螺旋藻組, 每組10只。
1.6 抗生素相關性腹瀉模型的建立
對模型組、生理鹽水對照組、螺旋藻組的小鼠, 每次灌胃0.45 g/m L的氨芐青霉素[8]0.5 m L, 每天2次, 連續3 d, 正常組每次灌胃0.5 m L生理鹽水, 每天2次。3d后, 正常組小鼠大便正常, 其余3個小組的小鼠均出現水樣稀便, 抗生素相關性腹瀉造模成功。
1.7 造模后小鼠的喂養
造模成功后, 每天除正常喂食外, 生理鹽水對照組每天用生理鹽水灌胃2次, 每次0.5 m L;螺旋藻組每天用3.34g/L螺旋藻懸液灌胃2次, 每次0.5 m L;模型組自然恢復。
1.8 取樣及樣品處理
造模成功后, 第0 d、2 d、4 d、6 d對各組小鼠新鮮大便無菌采樣, 將樣品連續10倍稀釋至10-6, 每個稀釋度取樣0.1 m L涂于EMB、TPY、TSC、BDS、改良MC培養基, 37 ℃培養48 h后分別對腸桿菌、雙歧桿菌、產氣莢膜梭菌、擬桿菌和乳桿菌進行平板計數。
1.9 數據處理
數據用均數±標準差 () 表示, 采用SPSS軟件處理, 不同實驗組之間的差異分析采用t檢驗, P<0.05為差異有顯著性統計學意義, P<0.01為差異有極顯著性統計學意義。
2 結果與分析
2.1 正常組和模型組小鼠大便菌群比較分析
由表1可知, 模型組相對健康組, 腸桿菌、雙歧桿菌、擬桿菌、乳桿菌群數量明顯減少, 產氣莢膜梭菌菌群數量明顯增加, 模型組與正常組小鼠大便菌群間存在顯著性差異 (P<0.01) , 結果顯示模型組小鼠大便中的出現菌群紊亂。
2.2 造模后各組小鼠大便中菌群的比較分析
由圖1~圖5可以看出, 正常組小鼠在喂養過程中大便菌群數量都很穩定, 無明顯波動。圖1、圖3、圖4可以看出, 造模成功后2 d, 模型組、生理鹽水對照組、螺旋藻組小鼠大便中的腸桿菌、擬桿菌、產氣莢膜梭菌菌群相對于正常組出現了異常增殖, 遠高于正常組 (P<0.01) ;隨后4 d、6 d, 模型組、生理鹽水對照組、螺旋藻組中這3種菌群數量逐漸下降, 其中模型組和生理鹽水對照組的菌群數量接近, 無顯著差異, 螺旋藻組中3種菌群數量下降速度相對模型組和生理鹽水對照組更快, 差異顯著 (P<0.01) , 并逐漸接近正常組水平。圖2和圖5中可以看出, 造模成功后2 d, 模型組、生理鹽水對照組、螺旋藻組小鼠大便中雙歧桿菌和乳桿菌菌群數量低于正常組 (P<0.01) ;隨后4 d、6 d, 3組小鼠大便中的雙歧桿菌和乳桿菌菌群數量都趨向回升, 模型組和生理鹽水對照組菌群數量接近, 螺旋藻組相對于前2組回升速度明顯更快 (P<0.01) 。
3 結論與討論
小鼠大便次數較多, 新鮮大便中的菌群能夠反映出腸道菌群的情況。從本文實驗數據分析可以看出, 抗生素相關性腹瀉導致小鼠的大便菌群異常, 異常菌群有一定的自我恢復能力, 生理鹽水對其無明顯治療作用, 而螺旋藻灌胃可以明顯抑制大便菌群的異常增殖, 并促進其中雙歧桿菌和乳桿菌菌群數量回升, 對菌群異常的恢復有顯著效果。大便菌群的變化反映出腸道菌群的變化, 氨芐青霉素導致的腹瀉使小鼠腸道菌群紊亂, 腸道菌群能夠緩慢自我恢復, 生理鹽水對其恢復無明顯作用, 螺旋藻則能顯著促進小鼠腸道菌群的恢復, 促進益生菌的增殖。
摘要：通過對腹瀉小鼠灌食螺旋藻, 對比給藥組、模型組和正常組小鼠大便中菌種的變化, 探索螺旋藻對抗生素相關腹瀉小鼠腸道菌群的影響。結果表明:抗生素相關性腹瀉導致小鼠的大便菌群異常, 異常菌群有一定的自我恢復能力, 生理鹽水對其無明顯治療作用, 螺旋藻灌胃可以明顯抑制大便菌群的異常增殖, 并促進其中雙歧桿菌和乳桿菌菌群數量回升, 對菌群異常的恢復有顯著效果。
關鍵詞：螺旋藻,抗生素,腹瀉,小鼠,大便菌群
參考文獻
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