摘要：精制蘆薈多糖以不同劑量連續多次給小白鼠后腿肌肉注射后, 觀測其腹腔巨噬細胞的吞噬情況。結果表明, 高劑量 (每只每天4 mg) 蘆薈多糖能明顯提高小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬百分率和吞噬指數 (P<0.01) , 而低劑量組 (每只每天2 mg) 對小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬百分率和吞噬指數沒有影響。表明蘆薈多糖能明顯提高單核吞噬細胞的功能, 從而增強機體免疫功能, 同時也對雄性的睪丸等生殖腺有明顯的抑制作用。
關鍵詞：蘆薈,小白鼠,單核吞噬細胞,免疫增強
蘆薈是一種集醫藥、食用、美容、觀賞于一體的百合科多年生經濟草本植物。作為中藥, 具有輕瀉、抗菌、抗病毒、抗炎 、促進傷口愈合及調節機體免疫功能和防輻射等作用[1,2,3]。蘆薈經過一定的加工處理后制成蘆薈多糖凍干粉劑, 以不同劑量連續給予小白鼠, 觀測對小白鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的作用, 以探討其對機體非特異性免疫功能的影響。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 蘆薈多糖:
市購新鮮庫拉索蘆薈, 經過一系列加工處理制成蘆薈多糖的凍干粉劑。
1.1.2 試驗動物:
18～25 g小白鼠, 昆系, 外購種鼠后自繁自養。
1.1.3 主要試劑及儀器:
阿氏液 , 生理鹽水, 4% (v/v) Giemsa-wright染液, 1∶1丙酮—甲醇固定液, 2%雞紅細胞等均由本實驗室自行配制。普通光學顯微鏡, 日本生產。
1.2 方法
1.2.1 藥物的給予方法:30只小白鼠隨機平均分為3組, 每組10只, 一組為生理鹽水注射對照, 每只每天給予生理鹽水0.2 mL;二組為蘆薈多糖給藥低劑量組, 每只每天給與2 mg蘆薈多糖;三組為蘆薈多糖給藥高劑量組, 每天給與4 mg蘆薈多糖, 分別于每天下午兩后肢輪流肌肉注射, 連用8 d。
1.2.2 吞噬雞紅細胞的巨噬細胞的制作方法:按謝仲權等介紹的方法進行[4,5], 末次給藥的第二天上午給每鼠腹腔注射2%雞紅細胞懸液1 mL間隔2 h, 頸椎脫臼處死, 仰面固定于鼠板上, 正中剪開腹壁皮膚, 經腹膜向腹腔內注入生理鹽水2 mL, 轉動鼠板1 min, 吸出腹腔洗液約1 mL均勻滴于載玻片上, 放入墊有濕紗布的搪瓷盒內, 立即 37℃孵育30min, 于生理鹽水中漂去雞紅細胞及未被吞噬的其它細胞, 吹干, 以1∶1丙酮、甲醇溶液固定5 min, 4% ( v/v) Giemsa-wright 染液中染色3 min, 晾干后油鏡觀察。
1.2.3 計數:油鏡下記數巨噬細胞, 每片200個, 同時記數其中吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數和被吞噬的雞紅細胞總數, 記錄結果, 計算吞噬百分率和吞噬指數 (吞噬百分率=吞噬雞紅細胞的巨噬細胞/2, 吞噬指數=被吞噬的雞紅細胞總數/200) 。
1.2.4 注射部位及其周圍損傷觀察:每天注射時觸摸注射部位的硬度情況以及是否異常, 同時觀察睪丸等生殖腺的外觀變化情況。
1.2.5 數據處理與分析:采用SSPS (11.0) 軟件對數據進行方差分析, 并用LSD進行平均數間差異顯著性檢驗。
2 結果與分析
蘆薈多糖對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響見表1。由表1可見高劑量 (每天每只4 mg) 蘆薈多糖能明顯提高小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬百分率和吞噬指數 (P<0.01) , 而低劑量組 (每天每只2 mg) 對小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬百分率和吞噬指數沒有影響。
據觀察兩種劑量的注射部位基本沒有腫硬等情況發生, 但睪丸等生殖腺卻在第3、4天后逐步出現萎縮直至壞死, 高劑量組比低劑量組出現的時間要早和快, 雌性的外生殖器無明顯外觀變化。
注:同列肩標字母相同表示差異不顯著, 不同且雙寫表示差異顯著和極顯著
3 結論與討論
動物機體的免疫功能包括非特異性免疫的和特異性免疫, 觀測小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能是觀察藥物對動物單核吞噬系統功能的影響, 也是觀測非特異性免疫功能強弱的方法之一。
試驗所用蘆薈經精致提煉的多糖 (4 mg/只) 極其明顯的升高了小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬率及吞噬指數, 說明它具有增強小鼠單核系統的吞噬能力, 從而提高機體的非特異性免疫功能, 而具有增強免疫功能的作用。這和宮朋等的報道相同[1,3]。
然而持續給藥對雄性生殖腺的影響與毛小平等的研究報道一致[6], 只不過他們的給藥方式是口服。這說明無論是那種給藥途徑均可顯著影響雄性小鼠的睪丸狀況, 提示蘆薈對雄性鼠性腺有較大的作用, 這些是否與它的抗生育作用有關, 有待進一步研究。
總之, 蘆薈多糖能顯著地增強小鼠的非特異性免疫功能, 從而具有增強免疫功能的作用, 同時也明顯影響雄性小鼠的睪丸等生殖腺。
參考文獻
[1]宮朋, 揚長樹.木立蘆薈多糖對免疫功能的影響[J].人參研究, 2000, 12 (2) :28~29.
[2]吳春玲.蘆薈的藥理與臨床應用[J].海峽藥學, 2004, 16 (1) :92~94.
[3]劉昊, 佟建明, 賈洪強, 等.蘆薈粉對不同性別肉仔雞免疫機能及生產性能的影響[J].福建農業學報, 2007, 22 (3) :288~292.
[4]謝仲權, 牛樹琦, 劉風華.天然物中草藥飼料添加劑研究方法[M].北京:中國農業科技出版社, 2001:49~52.
[5]徐叔云, 卞如濂, 陳修, 等.藥理試驗方法學[M].北京:人民衛生出版社, 1982:1456~1457.
[6]毛小平, 張潔, 毛曉健, 等.蘆薈抗生育的部分藥理研究[J].中醫藥學刊, 2004, 22 (5) :958~959.